化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
包被條件：PLL(0.1mg/ml)，明膠(0.1%)
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
傳代比例：1:2
細(xì)胞簡介：大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進(jìn)入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞對維持大隱靜脈動態(tài)平衡起著重要作用。它們合成、分泌凝血和纖溶系統(tǒng)的激活因子和抑制因子、影響血小板粘附和聚集的調(diào)節(jié)因子；大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞還釋放控制細(xì)胞增殖和調(diào)節(jié)血管壁緊張度的分子。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1550 |
組織來源 | 大隱靜脈組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠直腸平滑肌細(xì)胞 | 人牙齦上皮細(xì)胞 |
神經(jīng)節(jié)苷酯抗體 | 腫瘤蛋白P53誘導(dǎo)蛋白11抗體 |
人牙髓干細(xì)胞 | 富含脯氨/絲氨卷曲螺旋蛋白1抗體 |
人口腔黏膜上皮細(xì)胞 | 成纖維細(xì)胞生長因子11抗體 |
人牙齦成纖維細(xì)胞 | 鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體 |
人角膜上皮細(xì)胞 | 粘蛋白7抗體 |
人晶狀體上皮細(xì)胞 | 粘蛋白15抗體 |
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體 |
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞 | 基質(zhì)金屬蛋白28抗體 |
人舌表皮細(xì)胞 | 內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體 |
人視網(wǎng)膜色上皮細(xì)胞 | 熱休克蛋白58抗體 |
人脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞 | 大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞趨化樣因子超家族成員7抗體 |
人視網(wǎng)膜muller細(xì)胞 | 睪丸癌中心體相關(guān)蛋白抗體 |
人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 促進(jìn)成骨細(xì)胞分化因子/GDPD2抗體 |
人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基8抗體 |
注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
化工儀器網(wǎng)