化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
實驗外包:
1.基因組學(xué)：基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué)：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測：Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué)：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動物模型：原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動物模型構(gòu)建
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
1 mL | FS-P013315 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例） 1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。 2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。 3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。 4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。 5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。 6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 | 二、樣品DNA的制備 8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取， 多出的一個是PC（樣品制備陽性對照）， 一個是NC（樣品制備陰性對照）。 可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。 9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒。 | 三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行） 10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。 11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
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PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
Phospho-MARCKS (Ser152/156) /FITC 熒光標(biāo)記磷化丙蛋白激C底物Marcks抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
TFPI-2/FITC 熒光標(biāo)記組織因子途徑抑制劑-2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADAM23 去整合樣金屬蛋白23抗體 0.2ml
Rabbit chicken IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
GPR135 G蛋白偶聯(lián)受體GPR135蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Bovine IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗IgM 0.1ml
TFPI-2/FITC 熒光標(biāo)記組織因子途徑抑制劑-2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
VEGF-C(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C) ELISA KIT 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子CMulti-class antibodies： 48T
GFR Alpha-1 GDNF家族受體α-1抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml
CT-1(Human cardiotrophln 1) ELISA Kit 人心肌營養(yǎng)1 96T
Rasgrp1 Ras蛋白特異鳥核苷釋放因子1抗體 0.2ml
Chloroplast protease 葉綠體蛋白抗體(植物) 1ml
GFR Alpha-1 GDNF家族受體α-1抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1ml
GPR177 G蛋白偶聯(lián)受體GPR177蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ALR 肝再生增強因子抗體 0.1ml
Ki-67/FITC 熒光標(biāo)記Ki-67 Antigen抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Guinea pig IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 0.1ml
SIRT1/FITC 熒光標(biāo)記沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
通用型蛋白酶抑制劑混合液，100X小鼠腸脂肪結(jié)合蛋白（IFABP/FABP2）elisa檢測試劑盒
小鼠腦紅蛋白（NGB）elisa檢測試劑盒
小鼠肌肉糖原磷化（PYGM）elisa檢測試劑盒
小鼠胰島自身抗體（IAA）elisa檢測試劑盒
小鼠N-乙酰半乳糖-6-硫酯（GAS）elisa檢測試劑盒
小鼠肝輔助因子II（HC II）elisa檢測試劑盒
小鼠抑制B（INHB）elisa檢測試劑盒
小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白1（IGFBP-1）elisa檢測試劑盒
小鼠γ干擾誘導(dǎo)蛋白16/p16（IFI16/p16）elisa檢測試劑盒
小鼠肝癌衍生生長因子（HDGF）elisa檢測試劑盒
小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白4（IGFBP-4）elisa檢測試劑盒
小鼠巨噬移動抑制因子（MIF）elisa檢測試劑盒
小鼠神經(jīng)絲蛋白（NF）elisa檢測試劑盒
小鼠基質(zhì)金屬蛋白原-9（Pro-MMP-9）elisa檢測試劑盒
小鼠核因子κB受體活化因子配基（RANκL）elisa檢測試劑盒
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