人主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞永生化的相關(guān)產(chǎn)品：大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞IM95m細(xì)胞IMR32細(xì)胞IOWA-1T細(xì)胞JRT3-T35細(xì)胞J558細(xì)胞JC細(xì)胞JHH-2細(xì)胞JHH-4細(xì)胞JHH-5細(xì)胞JHH-6細(xì)胞JHH-7細(xì)胞Jiyoye細(xì)胞KMS-27細(xì)胞KMS-28BM細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞詳述

主動脈瓣施半月瓣，位于左心室和主動脈之間，抑制射入主動脈的血液回流入左心室。

主動脈瓣鈣化可引起主動脈瓣狹窄關(guān)閉不全等，施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變，其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明，瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向城固細(xì)胞樣細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1） 組織來源于人的正常主動脈組織。

2） 細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。  

3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5） 細(xì)胞生長方式：長梭形、不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。

注意事項：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

公司正在出售的產(chǎn)品：