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血清的儲(chǔ)存與應(yīng)用探究
閱讀：132 發(fā)布時(shí)間：2024-3-18血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確的應(yīng)用及保存血清，才能使血清施展應(yīng)有的效果。
一、血清儲(chǔ)存：
1.應(yīng)用前處理:大部分血清在應(yīng)用前必需滅活處置，即560C30分鐘。滅活的目標(biāo)是去除血清中的補(bǔ)體身分，防止補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞發(fā)生毒性同化。血清顛末滅活也會(huì)喪失一些對(duì)細(xì)胞無利的成分，如發(fā)展因子，是以也有人提出血清不經(jīng)滅活間接用于造就，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體身分。對(duì)付一些品德高的胎牛血清和新牛血清能夠斟酌不經(jīng)滅活間接用于細(xì)胞造就。
2.應(yīng)用濃度:自從有了分解造就基，血清便是作為一種增加身分與分解造就基混雜應(yīng)用，應(yīng)用濃度一樣平常為5-20}，最罕用是10}。過量血清容易使造就中的細(xì)胞發(fā)生變更，特別是一些二倍體的無窮細(xì)胞系，敏捷發(fā)展以后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
3.貯存條件:血清一樣平常貯存于一200C，同時(shí)應(yīng)防止重復(fù)凍融。購置大包裝的血清后，首先要滅活處置，而后分裝成小包裝，貯存于一200C，應(yīng)用前熔化。熔化時(shí)最好現(xiàn)置于40C。熔化后的血清在40C不宜長期寄存，應(yīng)盡快應(yīng)用。
4.選購血清時(shí)，先從供應(yīng)商處討取樣品停止實(shí)驗(yàn)，選定一批后就要保存充足應(yīng)用6個(gè)月至1年的量，直至用另一批顛末事后實(shí)驗(yàn)的樣品取代。
二、血清的解凍：
當(dāng)血清需要被解凍時(shí)，我們不建議大家把剛從-20℃中拿出的冰凍血清，直接放入4℃冰箱中過夜融化，也不要在室溫進(jìn)行過夜解凍。
由于血清含有蛋白質(zhì)等干物質(zhì)，這類物質(zhì)容易先融化析出，水這類溶劑后融化，導(dǎo)致血清產(chǎn)生沉淀，影響使用效果。
因此，要盡可能保證所有成分同步融化，因此我們建議使用三步法融化。
需要注意的是，如果血清是儲(chǔ)存在-80℃冰箱中，三步法解凍前，應(yīng)先將血清轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中存放1-2天。
一次解凍后，分裝至無菌離心管中，盡量保證每管是一次的用量，分裝管解凍也遵循三步法，解凍后需全部用完。
三、血清的應(yīng)用：
1、血清的熱滅活：
血清進(jìn)行熱滅活的目的是，利用較高的溫度使補(bǔ)體失活。由于胎牛血清會(huì)嚴(yán)格控制采血時(shí)間為5-8月齡的胎牛，此時(shí)還未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng)，因此，合格的胎牛血清，是不需要滅活的。
但是實(shí)驗(yàn)中如果需要新生牛血清、小牛血清、豬血清或馬血清這些血清時(shí)，則需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求而定。
根據(jù)血清廠家多年來總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)，常規(guī)解凍后，40℃水浴加熱20分鐘即可，能夠盡可能地保留營養(yǎng)成分。
2、細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用：
對(duì)于新的細(xì)胞系或從無血清培養(yǎng)轉(zhuǎn)變到胎牛血清培養(yǎng)的細(xì)胞系，需要進(jìn)行適應(yīng)期。在初始適應(yīng)期，可以將血清濃度逐漸降低，直到細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)為止。
3、關(guān)注血清的批次：
相同品牌的胎牛血清，在蛋白質(zhì)含量等方面，可能會(huì)存在批次差異，因此在同一實(shí)驗(yàn)中最好使用來自同一批次的血清，以減少變異性。如果不得不使用不同批次的胎牛血清，請(qǐng)進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)以確保結(jié)果的可重復(fù)性。