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選擇合適二抗需考慮方面
閱讀：441 發(fā)布時間：2022-7-25 二抗是指用于靶向結(jié)合一抗的抗體。在多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實驗中，二抗經(jīng)常和一抗結(jié)合使用以檢測目標(biāo)蛋白。很多二抗都帶有標(biāo)記物，例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過氧化物酶（HRP），從而使二抗的信號可以被檢測到。
實驗中也可以使用帶有標(biāo)記物的一抗，但是二抗有很多優(yōu)點。無論是使用哪種一抗進行檢測，使用二抗可便于更換不同的標(biāo)記物。例如，同樣的一抗可以與HRP標(biāo)記二抗一起用于免疫印跡，也可以與另一種Alexa Fluor 488熒光標(biāo)記二抗一起用于免疫熒光實驗。
另外，二抗結(jié)合在抗原位置的標(biāo)記染料比直標(biāo)一抗要多，從而增強檢測信號。使用二抗可以避免對一抗進行復(fù)雜且昂貴的化學(xué)標(biāo)記（偶聯(lián)），而且偶聯(lián)反應(yīng)（具有氨基酸特異性）可能干擾一抗對抗原的識別。
二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點使得其在免疫學(xué)實驗中得以廣泛應(yīng)用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對每一個一抗進行標(biāo)記，大大節(jié)省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結(jié)合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。
二抗，廣義上是指專門和一抗進行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從以下幾個方面考慮：
1.一抗的種屬來源
根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。例如：一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。
2.一抗的類別亞型
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會在產(chǎn)品說明書中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對這一亞型的二抗。此種抗體在雙標(biāo)記實驗中尤其合適。
3.二抗的藕聯(lián)標(biāo)記
一般來講，藕聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP）、熒光基團、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。WB和ELISA常用的二抗是酶標(biāo)二抗，而免疫熒光實驗中通常使用熒光基團標(biāo)記的二抗，而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。