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支原體污染的檢測及鑒定方法
閱讀：665 發(fā)布時間：2022-4-13支原體污染的檢測及鑒定方法：
1、分離培養(yǎng)法
支原體的病原學檢測主要是從被污染的細胞、雞胚中分離培養(yǎng)出支原體來確定，分離培養(yǎng)法是檢測支原體污染中最為可靠準確的方法。但是支原體對環(huán)境的影響敏感，容易被滅活，而且分離培養(yǎng)操作相對繁瑣，所需時間較長，因此只能夠對支原體污染進行定性觀察。分離培養(yǎng)法在常規(guī)的支原體檢測中多用于輔助其它檢測方法。
2、DNA熒光染色法
DNA熒光染色法較分離培養(yǎng)法縮短了檢測周期，主要用于細胞培養(yǎng)中污染支原體的檢測。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzole）Hoechst33258能夠結合支原體DNA中的A-T堿基富集區(qū)域的原理，被支原體污染的細胞經染色后，其細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一的熒光點，即是富含A-T堿基區(qū)域的支原體DNA。
3、PCR技術
PCR作為一種快速、靈敏、特異且簡便的基因診斷技術已應用于科學研究和疾病的診斷。根據支原體基因組內的保守序列設計特異引物，對待檢樣品的核酸進行擴增，通過對擴增產物的大小分析作出診斷。PCR檢測技術用于支原體污染的檢測，周期短、靈敏度高、特異性好、操作簡單且一次可檢測大量樣品。
4、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
ELISA用于支原體污染的檢測中，有著良好的特異性和敏感性，一次可以完成大量樣品的檢測。如今已有LONZA等公司開發(fā)了針對細胞中污染支原體的檢測試劑盒，具有簡便、快速與定量定性檢測等特點。
5、電鏡
一般在細胞培養(yǎng)48～72小時，細胞接近匯合前，用胰酶消化細胞制成細胞懸液后進行固定、包埋、切片后才能進行觀察。
6、定期檢測
支原體感染會使培養(yǎng)細胞慢慢枯萎，因此對培養(yǎng)細胞定期進行支原體檢測非常重要。一般來說每1至3個月就應該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規(guī)化堅持下去，是細胞培養(yǎng)實驗室應對支原體感染的關鍵。