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冷凍細(xì)胞凍結(jié)操作步驟
閱讀：371 發(fā)布時(shí)間：2022-1-11冷凍細(xì)胞凍結(jié)程序:
1. 根據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單zhi定之基礎(chǔ)培育基種類、血清種類和其它zhi定之成份和份額，制備培育基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法當(dāng)即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培育基或不同之血清種類，若因試驗(yàn)需要，有必要有所不同時(shí)，必須以緩慢份額漸次改變培育基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之試驗(yàn)。
2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對細(xì)胞而言差異極大，請必須根據(jù)細(xì)胞株資料單zhi定之血清種類培育之。
3. 將培育基置于37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管，當(dāng)即放入37 °C 水槽中快速凍結(jié)，水面高度不行接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易產(chǎn)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)悉數(shù)融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺。
4. 根據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10 ml培育基加至T25 或T75 flask中。取出已凍結(jié)之細(xì)胞懸浮液，慢慢參加T25或T75 flask 內(nèi)之培育基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2培育箱培育。
5. 對絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1 % 以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需馬上由凍結(jié).細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞成長或貼附良好后再去除即可。
針對極少數(shù)因?qū)MSO 靈敏或會(huì)形成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需當(dāng)即去除DMSO 者，則可將凍結(jié)后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培育基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，參加適量新鮮培育基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培育瓶中，再放入37 °C，5 % CO2 培育箱培育。