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豬ELISA檢測試劑盒實驗流程方法
閱讀：213 發(fā)布時間：2021-3-26豬ELISA檢測試劑盒實驗流程:
1. 產(chǎn)品僅用于科研實驗前標準品、試劑及樣本的準備；
2. 加樣（標準品及樣本）100µL，37°C孵育1小時；
3. 吸棄，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時；
4. 洗板3次；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL，立即450nm讀數(shù)。
豬ELISA檢測試劑盒操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔加待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液
100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃，60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見孔內(nèi)有明顯藍色，即可終止）。
5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。