以兔為宿主制備的針對(duì)組蛋白H3在賴氨酸27位點(diǎn)三甲基化且絲氨酸28位點(diǎn)磷酸化（H3K27me3S28p）的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience銷售產(chǎn)品Anti-H3K27me3S28p多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27me3S28p多克隆抗體：

克隆性：多克隆

宿主物種/表達(dá)系統(tǒng)：兔

純化方法：親和純化

形式：水溶液

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液

濃度：50 ?g/295 ?l

免疫原：合成肽

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性

在-80°C下可保存長(zhǎng)達(dá)2年。分裝以避免反復(fù)凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個(gè)月。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)結(jié)果

使用經(jīng)秋水仙堿處理的人HeLa細(xì)胞、針對(duì)H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25245）和優(yōu)化的qPCR引物組合進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)使用了100萬(wàn)細(xì)胞的剪切染色質(zhì)?？贵w用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對(duì)照。定量PCR使用了活性基因GAPDH的啟動(dòng)子引物作為陰性對(duì)照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的編碼區(qū)引物作為陽(yáng)性對(duì)照。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對(duì)量，經(jīng)qPCR分析后得出）。這些結(jié)果與H3K27me3S28p主要存在于非活性基因中的觀察結(jié)果一致。

ChIP-seq實(shí)驗(yàn)結(jié)果

使用2 ?g針對(duì)H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25245），在150萬(wàn)經(jīng)秋水仙堿處理的HeLaS3細(xì)胞的剪切染色質(zhì)上進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina HiSeq測(cè)序儀上進(jìn)行分析。文庫(kù)制備、簇生成和測(cè)序均按照制造商說明進(jìn)行。51 bp的標(biāo)簽通過BWA算法與人類基因組比對(duì)。圖2顯示了圍繞TSH2B和MYT1陽(yáng)性對(duì)照基因（圖2A和B，箭頭所示）以及染色體3和20（圖2C和D）的基因組區(qū)域的富集情況。

抗體滴度測(cè)定

為了測(cè)定抗體滴度，使用針對(duì)H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25245）進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，抗體進(jìn)行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標(biāo)組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖（圖2），估計(jì)抗體的滴度為1:4,300。

交叉反應(yīng)性測(cè)試

使用針對(duì)H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25245）進(jìn)行點(diǎn)雜交分析，測(cè)試其與其他修飾的組蛋白H3和H4肽段以及未修飾的H3K27S28序列的交叉反應(yīng)性。將含有相應(yīng)組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點(diǎn)在膜上，抗體稀釋度為1:2,000。圖3顯示抗體對(duì)目標(biāo)修飾具有高特異性。

Western Blot分析

A. 使用針對(duì)H3K27me3S28p的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25245），對(duì)HeLa細(xì)胞的組蛋白提取物（15 ?g，泳道1）和1 ?g重組組蛋白H3（泳道2）進(jìn)行Western Blot分析?？贵w在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:100。右側(cè)標(biāo)記了目標(biāo)蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標(biāo)記（單位：kDa）。

B. 使用針對(duì)H3K27me3S28p的抗體進(jìn)行細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)。對(duì)處于細(xì)胞周期不同階段的細(xì)胞進(jìn)行Western Blot分析（1=非同步群體，2=G1/Sa，3=G1/Sb，4=S期，5=G2/M，6=M期，7=G1期）。圖片顯示在有絲分裂期間H3K27me3S28p表達(dá)的顯著峰值。

應(yīng)用

ChIP/ChIP-seq（1 - 2 ?g/ChIP）

ELISA（1:200）

點(diǎn)雜交（1:2000）

Western Blot（1:1000）

運(yùn)輸溫度：-20°C或-80°C

物種反應(yīng)性：人

交叉反應(yīng)性：特異性識(shí)別H3K27me3S28p。不與H3K9me3、H3K27me（1、2或3）、H3S10p、H3S28p或H3S28un發(fā)生交叉反應(yīng)。在高濃度下與H3K9me3S10p有輕微交叉反應(yīng)。

備注：每次免疫沉淀的抗體優(yōu)良用量應(yīng)由終端用戶確定。建議測(cè)試1 - 5 ?g/次。

注意事項(xiàng)：避免反復(fù)凍融。

科學(xué)分類：抗體

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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