以兔為宿主制備的針對含有二甲基化賴氨酸36（H3K36me2）的組蛋白H3的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。 

作為BPS Bioscience在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience銷售產(chǎn)品Anti-H3K36me2多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K36me2多克隆抗體：

克隆性：多克隆  

宿主物種/表達系統(tǒng)：兔  

純化方法：全血清  

形式：水溶液  

配方：含有0.05%疊氮化物的全兔抗血清  

濃度：100 ?l  

免疫原：合成肽  

儲存/穩(wěn)定性  

在-80°C下可保存長達2年。分裝以避免反復凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個月。  

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實驗結(jié)果  

使用人HeLa細胞、針對H3K36me2的抗體（產(chǎn)品編號25248）和優(yōu)化的qPCR引物組合進行ChIP實驗。實驗使用了10,000個細胞的剪切染色質(zhì)?？贵w用量梯度為1、5和10 ?l/次ChIP實驗，并進行了分析。此外，抗體在與5 nmol相應阻斷肽室溫孵育1小時后，進行了相同的梯度分析。以5 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對照。定量PCR使用了活性基因GAPDH和ALDOA的啟動子引物，以及肌生成分化基因（MYOD）的編碼區(qū)引物。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對量，經(jīng)qPCR分析后得出）。  

ChIP-seq實驗結(jié)果  

使用0.5 ?l針對H3K36me2的抗體（產(chǎn)品編號25248），在100萬HeLa細胞的剪切染色質(zhì)上進行ChIP實驗。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina基因組分析儀上進行分析。文庫制備、簇生成和測序均按照制造商說明進行。36 bp的標簽通過ELAND算法與人類基因組比對。圖2顯示了在染色體20、12和X的3個基因組區(qū)域的信號分布。  

抗體滴度測定  

為了測定抗體滴度，使用針對H3K36me2的抗體（產(chǎn)品編號25248）進行ELISA實驗，抗體進行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標組蛋白修飾的肽段。通過繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖（圖3），估計抗體的滴度為1:31,000。  

交叉反應性測試  

使用針對H3K36me2的抗體（產(chǎn)品編號25248）進行點雜交分析，測試其與其他修飾的組蛋白H3肽段以及未修飾序列的交叉反應性。將含有相應組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點在膜上，抗體稀釋度為1:100,000。圖4顯示抗體對目標修飾具有高特異性。  

Western Blot分析  

使用針對H3K36me2的抗體（產(chǎn)品編號25248），對HeLa細胞的組蛋白提取物（15 ?g）進行Western Blot分析?？贵w在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:1000。右側(cè)標記了目標蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標記（單位：kDa）。泳道1顯示了抗體的Western分析結(jié)果；泳道2顯示了抗體在與5 nmol相應阻斷肽室溫孵育1小時后的分析結(jié)果。  

免疫熒光分析  

HeLa細胞用針對H3K36me2的抗體（產(chǎn)品編號25248）和DAPI進行染色。細胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進行封閉。細胞用H3K36me2抗體（左側(cè)）在封閉液中稀釋1:500進行免疫熒光標記，隨后用與Alexa488偶聯(lián)的抗兔抗體進行二抗標記。中間圖顯示了DAPI對細胞核的染色。右側(cè)圖顯示了兩種染色的合并圖像。  

應用  

ChIP/ChIP-seq（5 ?l/IP）  

ELISA（1:1000）  

點雜交（1:100,000）  

Western Blot（1:1000）  

免疫熒光（1:500）  

運輸溫度：-20°C或-80°C  

物種反應性：人  

備注：每次免疫沉淀的抗體優(yōu)良用量應由終端用戶確定。建議測試1 - 5 ?g/次。  

注意事項：避免反復凍融。  

科學分類：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領(lǐng)域的供應商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉(zhuǎn)導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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