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TERMIPol DNA聚合酶:飛行時(shí)間質(zhì)譜法SNP分析優(yōu)選

時(shí)間:2019/2/27閱讀:410
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單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)主要指基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性,是人類可遺傳的變異中常見的一種。SNP在人類基因組中廣泛存在,平均每500~1000個(gè)堿基對(duì)中就有1個(gè),估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300萬個(gè)甚至更多。SNP在CG序列上出現(xiàn)為頻繁,而且多是C→T。

 

遺傳疾病診斷、致病候選基因研究、藥物篩選研究、分子標(biāo)記輔助育種、群體遺傳研究等領(lǐng)域都會(huì)涉及到SNP分型分析。

 

SNP基因分型的常見方法有:

 

Taqman 探針法、SNaPshot法、飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)分型、HRM(高分辨率熔解曲線)分型等技術(shù)平臺(tái)。其中,基于時(shí)間飛行質(zhì)譜(MALDI-TOF)完成的SNP檢測(cè)準(zhǔn)確率可達(dá)99.9%,除了準(zhǔn)確性高、靈活性強(qiáng)、通量大、檢測(cè)周期短等優(yōu)勢(shì)外,有吸引力的應(yīng)該還是它的性價(jià)比。飛行時(shí)間質(zhì)譜平臺(tái)(MALDI-TOF)是通用的基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)的研究平臺(tái),該方法憑借其科學(xué)性和準(zhǔn)確性已經(jīng)成為該領(lǐng)域的新標(biāo)準(zhǔn)。

 

為此,我們推薦使用Solis BioDyne,增強(qiáng)摻入非常規(guī)核苷酸效率的TERMIPol ® DNA聚合酶,適合用于MALDI-TOF質(zhì)譜法其他引物延伸平臺(tái):

 

TERMIPol® DNA Polymerase

01-03-00500

HOT TERMIPol® DNA Polymerase

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       * 如上TERMIPol DNA聚合酶產(chǎn)品均已通過了Bruker與 Agena BioScience平臺(tái)的驗(yàn)證

 

Agena 平臺(tái)為例:《MassARRA系統(tǒng)》

原理首先通過PCR擴(kuò)增出含有SNP位點(diǎn)的一段DNA(SNP位點(diǎn)前后各50bp左右),然后用SAP酶去除掉PCR 體系中剩余的脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)和引物,然后加入一單堿基延伸引物,其3’末端堿基緊挨SNP位點(diǎn),采用四種ddNTP替代dNTP。這樣,探針在SNP位點(diǎn)處僅延伸一個(gè)堿基,連接上的ddNTP與SNP位點(diǎn)的等位基因?qū)?yīng)。用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS) 檢測(cè)延伸產(chǎn)物與未延伸引物間的分子量差異,確定該點(diǎn)處堿基。

 

實(shí)驗(yàn)流程如下:

1.PCR擴(kuò)增含有目的SNP 的DNA序列,并通過純化去除未結(jié)合的dNTPs

2.iPLEX單堿基延伸:純化后的PCR產(chǎn)物,針對(duì)每個(gè)靶點(diǎn)SNP設(shè)計(jì)一條延伸引物,在以ddNTPs為底物的體系中進(jìn)行單堿基延伸,每個(gè)SNP的等位基因延伸產(chǎn)物僅為末端一個(gè)堿基的差異。

3.純化,并將產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到SpectroCHIP芯片上,進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè),同一個(gè)SNP的等位基因由于分子量不同,形成不同的檢測(cè)峰而被區(qū)分。  

 

Solis BioDyne的TERMIPol® DNA Polymerase將會(huì)用于上圖中的單核苷酸延伸中

 

已發(fā)表文章:  

【1】Bormann, Felix Georg et al. “Epigenetic regulation of Amphiregulin and Epiregulin in colorectal cancer.” International journal of cancer 144 3 (2019): 569-581 .

【2】Wilcke, Arndt et al. “The role of gene DCDC2 in German dyslexics.” Annals of dyslexia59 1 (2009): 1-11 .

【3】Ikryannikova, L N et al. “A MALDI TOF MS-based minisequencing method for rapid detection of TEM-type extended-spectrum beta-lactamases in clinical strains of Enterobacteriaceae.” Journal of microbiological methods 75 3 (2008): 385-91 . 【4】Sauer, Sascha et al. “Single-nucleotide polymorphisms: analysis by mass spectrometry.” Nature Protocols 1 (2006): 1761-1771.

 除了上述的的分子診斷神器,Solis BioDyne為客戶提供終點(diǎn)PCR(end-point PCR),qPCR(real-time PCR),反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcription),以及其它PCR所需的配套試劑。產(chǎn)品線縱覽圖如下:  

 

 

 

 Solis BioDyne來源于歐盟-愛沙尼亞共和國(guó),自1995年以來,Solis BioDyne一直致力于開發(fā)和生產(chǎn)高品質(zhì)的生命科學(xué)試劑,現(xiàn)已成為當(dāng)今歐洲的試劑供應(yīng)商之一。高標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和服務(wù)使Solis BioDyne成為值得信賴的shouxuanPCR供應(yīng)商。我們的DNA聚合酶,PCR Master Mixes,qPCR Mixes和其它試劑被110多個(gè)國(guó)家的研究者所使用,包括dingji研究機(jī)構(gòu)和生物技術(shù)公司。

擁有dujia的蛋白質(zhì)穩(wěn)定技術(shù)zhuanli,確保其PCR酶與PCR Mixes產(chǎn)品具有*的穩(wěn)定性,研究者可以常溫運(yùn)輸以及常溫下配置PCR反應(yīng)體系(無需冰盒)。即使是室溫放置30天,其酶活性也沒有損耗。   作為Solis BioDyne在中國(guó)的區(qū)域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的Solis BioDyne產(chǎn)品以及訂制服務(wù)。  

Solis BioDyn想要了解更多,歡迎關(guān)注公眾號(hào):amyjetsci

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