什么情況下會(huì)選擇標(biāo)簽抗體用于免疫沉淀呢？

      當(dāng)某些目標(biāo)蛋白沒有對(duì)應(yīng)的特異性抗體（eg.抗體所識(shí)別的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽，無法與目的蛋白相互作用或抗體選擇不合適，所選抗體不能識(shí)別處于天然構(gòu)象的蛋白）而無法進(jìn)行免疫沉淀時(shí)，可以采用一個(gè)表位標(biāo)記蛋白后，再選擇針對(duì)此表位的標(biāo)簽抗體來進(jìn)行免疫沉淀。

      隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的迅猛發(fā)展，重組蛋白質(zhì)的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個(gè)親和標(biāo)簽如GST、Myc、His等，可用于輔助目標(biāo)蛋白的純化，這已經(jīng)被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測的這個(gè)有點(diǎn)被廣泛認(rèn)可。Myc標(biāo)簽相當(dāng)于人的c-Myc 410-419位肽段（序列為：EQKLISEEDL）。Myc標(biāo)簽可放在C端或N端，因此 Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測但很少用于純化。Myc標(biāo)簽已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。

    為什么推薦使用Myc標(biāo)簽抗體偶聯(lián)的瓊脂糖/磁珠？

      與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統(tǒng)免疫沉淀（IP）方法相比，Abbkine的瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合的步驟。偶聯(lián)抗體直接和目標(biāo)蛋白結(jié)合后，通過離心或使用磁力架，將目標(biāo)蛋白從細(xì)胞裂解液中分離出來。不僅讓實(shí)驗(yàn)變得簡單快捷，更可以避免非特異性結(jié)合，降低背景。表位標(biāo)記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細(xì)胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標(biāo)記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。

•       看到這里，您肯定會(huì)問，Protein A/G的缺點(diǎn)是什么？

1.       耗時(shí)：使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作
2.       效果差：當(dāng)抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時(shí)，ProteinA/G和抗體結(jié)合能力弱
3.       背景高：和樣本中的其他免疫球蛋白結(jié)合，產(chǎn)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致高背景

      這就是艾美捷科技為您推薦瓊脂糖&磁珠偶聯(lián)的Myc標(biāo)簽抗體的原因：

      為什么推薦使用Abbkine Myc標(biāo)簽抗體(2D5)偶聯(lián)的瓊脂糖/磁珠？

     該產(chǎn)品的Myc標(biāo)簽抗體為單克隆抗體，克隆號(hào)為(2D5)。其抗原為KLP偶聯(lián)的c-Myc 410-419位肽段（序列為：EQKLISEEDL），即Myc標(biāo)簽蛋白作為免疫原。該Myc單克隆抗體的效價(jià)非常高，WB實(shí)驗(yàn)推薦稀釋比率為 1:1000-1:10000，甚至有客戶報(bào)告更高的稀釋比率。在免疫熒光IF、免疫沉淀IP實(shí)驗(yàn)里的表現(xiàn)也很優(yōu)異。

      瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體，優(yōu)勢(shì)更加突出：

•       高特異性—高特異性單克隆標(biāo)簽抗體可實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量和高純度免疫沉淀
•       低背景—穩(wěn)定、預(yù)封閉的填料及特異性抗體減少了免疫沉淀過程中的非特異性結(jié)合
•       規(guī)格靈活：100ul, 400ul, 2ml，多規(guī)格可供選擇。滿足不同規(guī)模的免疫沉淀需求
•       操作方便—產(chǎn)品說明書提供了免疫沉淀優(yōu)化方案，一次免疫沉淀時(shí)間約1 - 2小時(shí)
•       兼容性強(qiáng)—填料可以兼容手動(dòng)及自動(dòng)化操作

      瓊脂糖/磁珠偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體使用說明：

•       *瓊脂糖微球是多孔的，這使得它們具有高的表面積與蛋白質(zhì)相互接觸，并可以容納大量的液體。在純化大量蛋白的時(shí)候，傳統(tǒng)的瓊脂糖微球偶聯(lián)抗體是IP實(shí)驗(yàn)的選擇。（瓊脂糖：每個(gè)樣品加入20ul懸液）
•       *在IP實(shí)驗(yàn)中，由于所有的相互作用均發(fā)生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重復(fù)性和純度通常高于瓊脂糖。磁性分離不需要離心和多次洗滌，且孵育時(shí)間短，在日常小規(guī)模、快速處理多個(gè)樣品的IP實(shí)驗(yàn)時(shí)，磁珠偶聯(lián)抗體更簡單、更快速。（磁珠：每個(gè)樣品加入10-20ul懸液）
•       *提供形式：液體（抗體-瓊脂糖/磁珠復(fù)合物：保護(hù)液=1:1，50%的懸浮液）
•       *儲(chǔ)存方式：4°C可保存一年，瓊脂糖偶聯(lián)標(biāo)簽抗體避免凍融和渦旋；磁珠偶聯(lián)標(biāo)簽抗體避免凍融和離心