正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

測定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質和線粒體中。
測定原理：
NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 

試劑的組成和配制：

試劑一、提取液 100 mL×1 瓶，在 4℃保存；

試劑二、液體 20 mL×1 瓶，在 4℃保存；

試劑三、粉劑×1 瓶，-20℃保存；

組織樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量

（104個）：試劑一體積（mL）為 1000~2000：1 的比例（建議 2000 萬細菌或細胞加入 1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、檢測工作液的配制：用時在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。；

3、測定前將檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液，混勻后立即記錄 340nm

處 20s 時的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2。

注意：若 A1-A2 大于 0.5，需將樣本用提取液稀釋，使 A1-A2 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。

計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH 活力單位的計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷V 樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 NAD-MDH 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T

=6430×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104

cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109

]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10-4

L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103

L / mol /cm；d：

比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；2000：細胞或細菌

總數(shù)，2000 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷V 樣÷T=12860×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 NAD-MDH 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織中每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T

=12860×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104

cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（2000×V 樣÷V 樣總）÷T=6.43×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2×10-4

L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103

L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.005 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；

T：反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；2000：細胞或細菌總數(shù)，2000 萬。

生化檢測試劑盒實驗操作說明：

一、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測、總抗氧化能力（TAC）檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡單易用的比色分析法，用于測定各種樣品中的XO活性，特點是測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測、脂質過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。

蛋白質羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點是：1.測定組織樣本、細胞、細菌、血清等中的蛋白質羰基含量。2.樣本處理、實驗步驟以及結果計算更加詳盡準確精煉。3.保質期長。

三、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例，提供一種簡單易用的比色測定法，用于定量測定血清，血漿，組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點是：1.測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL。

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