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NAD蘋(píng)果酸脫氫酶(NADMDH)測(cè)試盒微量法

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100管/96樣330元15 盒 可售
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣
貨號(hào) GOY-SH123 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)方法 微量法
產(chǎn)品類(lèi)別 輔酶Ⅰ系列 品牌 谷研
貨期 現(xiàn)貨    
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詳細(xì)介紹

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

商品屬性:

產(chǎn)品名稱(chēng)

NAD蘋(píng)果酸脫氫酶(NADMDH)測(cè)試盒微量法

規(guī)格

100管/96樣

檢測(cè)方法

微量法

貨號(hào)

GOY-SH123

產(chǎn)品分類(lèi)

輔酶Ⅰ系列

用途

僅供科研實(shí)驗(yàn)

NAD蘋(píng)果酸脫氫酶(NADMDH)測(cè)試盒微量法

測(cè)定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線(xiàn)粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線(xiàn)粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴(lài)的MDH和NADP-依賴(lài)的MDH,細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線(xiàn)粒體中。
測(cè)定原理:
NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
 

試劑的組成和配制:

試劑一、提取液 100 mL×1 瓶,在 4℃保存;

試劑二、液體 20 mL×1 瓶,在 4℃保存;

試劑三、粉劑×1 瓶,-20℃保存;

組織樣本的前處理:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

(104個(gè)):試劑一體積(mL)為 1000~2000:1 的比例(建議 2000 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,

加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、檢測(cè)工作液的配制:用時(shí)在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。;

3、測(cè)定前將檢測(cè)工作液在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液,混勻后立即記錄 340nm

處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2,計(jì)算 ΔA=A1-A2。

注意:若 A1-A2 大于 0.5,需將樣本用提取液稀釋?zhuān)?A1-A2 小于 0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。

計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH 活力單位的計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)NAD-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷V 樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T

=6430×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104

cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109

]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4

L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103

L / mol /cm;d:

比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.005 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:

反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌

總數(shù),2000 萬(wàn)。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)NAD-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷V 樣÷T=12860×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織中每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T

=12860×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104

cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109

]÷(2000×V 樣÷V 樣總)÷T=6.43×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4

L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103

L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.005 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;

T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000 萬(wàn)。

生化檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明:

一、抗氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括氧化酶(XO)活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性(GOD)檢測(cè)、總抗氧化能力(TAC)檢測(cè)、植物原花青素(OPC)含量檢測(cè)、植物類(lèi)黃酮含量檢測(cè)、植物總酚(TP)含量檢測(cè)試劑盒。

氧化酶(XO)活性分析試劑盒為例,提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色分析法,用于測(cè)定各種樣品中的XO活性,特點(diǎn)是測(cè)定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,以及廣泛的檢測(cè)范圍:15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括過(guò)氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過(guò)氧化氫(H2O2)檢測(cè)、脂質(zhì)過(guò)氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)、超氧陰離子含量檢測(cè)等試劑盒。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒(比色法)為例,提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法,用于分析不同生物樣品(細(xì)胞/組織裂解液,生物液體)中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點(diǎn)是:1.測(cè)定組織樣本、細(xì)胞、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。3.保質(zhì)期長(zhǎng)。

NAD蘋(píng)果酸脫氫酶(NADMDH)測(cè)試盒微量法 

 

三、抗逆系列生化檢測(cè)試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶(PPO)活性檢測(cè)、過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)試劑盒為例,提供一種簡(jiǎn)單易用的比色測(cè)定法,用于定量測(cè)定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點(diǎn)是:1.測(cè)定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過(guò)WST-8法測(cè)定SOD活性,zui大抑制率可接近100%,不受一些常見(jiàn)干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測(cè)范圍:3.13- 200U/mL。

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植物可溶性糖含量測(cè)試盒

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