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產(chǎn)品上新

愛必信互作系列試劑盒上新啦！CoIP和CHIP試劑盒是我們的老角色，上架以來受到各種好評！abs955文獻(xiàn)量飛速增長，目前單品已將近200篇，IF最高37.3！CHIP試劑盒文獻(xiàn)量也在快速增長中！最近終于！愛必信互作系列新增多款試劑盒！今天給小白淺淺分析一下各種試劑盒的區(qū)別。

abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒

表1 愛必信互作試劑盒

DNA pull down

原理：DNA pull down是用于分析蛋白質(zhì)與DNA互作的一種分析技術(shù)。通常用來分析目標(biāo)基因調(diào)控區(qū)域相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子及其他調(diào)控蛋白。

該技術(shù)針對目標(biāo)區(qū)域設(shè)計特異性DNA探針并經(jīng)過脫硫生物素標(biāo)記，標(biāo)記后探針可以和偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素親和結(jié)合，再與總蛋白提取物進行孵育，有互作的蛋白質(zhì)可以和DNA探針特異性結(jié)合，形成磁珠-DNA探針-蛋白復(fù)合物，洗滌去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，再經(jīng)過洗脫得到目的DNA探針-蛋白質(zhì)復(fù)合物，最后通過Western Blot或質(zhì)譜(MS)鑒定蛋白質(zhì)類型。多用于特定基因的轉(zhuǎn)錄因子研究。

DNA pull down原理圖

Chip原理

染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的理想技術(shù)，是目前研究轉(zhuǎn)錄因子與啟動子區(qū)域間相互聯(lián)系的較好方法。

在活細(xì)胞狀態(tài)下使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和DNA交聯(lián)，并用超聲波將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段。選擇與目的蛋白特異性結(jié)合的抗體免疫沉淀DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體，從而特異性地富集與目的蛋白結(jié)合的染色體片段。該DNA可用于后續(xù)的定量PCR檢測(qPCR)或高通量測序(seq)。常用于驗證或?qū)ふ遗c已知蛋白結(jié)合的DNA序列。

Chip原理圖

RNA pull down

RNA pull-down是研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白/RNA結(jié)合情況的技術(shù)。

先將RNA進行標(biāo)記（如生物素標(biāo)記），再與細(xì)胞裂解液共同孵育，從而形成RNA-RNA/蛋白質(zhì)復(fù)合物，進而檢測與之結(jié)合的RNA或蛋白質(zhì)。復(fù)合物洗脫后，通過熒光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量測序(RNA pull down-seq)方法來鑒定目標(biāo)RNN是否與某些RNA分子相互作用，通過Western blot(pull down-WB)實驗和質(zhì)譜(pull down--MS)技術(shù)檢測目標(biāo)RNA是否與某些蛋白相互作用。

RNA pull down原理

RIP原理

RIP技術(shù)(RNA Binding Protein lmmunoprecipitation, RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀)，是研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)，是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動態(tài)過程的有力工具。

該技術(shù)主要是運用目標(biāo)蛋白的特異性抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來，然后經(jīng)過分離純化對結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進行q-PCR驗證或高通量測序分析。

RIP原理圖

GST Pull-Down試劑盒

GST Pull-Down實驗是驗證體外蛋白互作的主要方式。通過體外表達(dá)親和蛋白-GST，將親和蛋白固化在谷胱甘肽親和樹脂上充當(dāng)“誘餌蛋白"，將細(xì)胞或者組織的總蛋白和此“誘導(dǎo)蛋白"混合孵育后可從中捕獲“目標(biāo)蛋白"，最后通過洗脫的方式將“目標(biāo)蛋白"洗脫后檢測，就可以分析蛋白和蛋白互作關(guān)系。

GST Pull-Down原理圖

CoIP原理

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)是基于抗體和蛋白的特異性親和作用，通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體，進而從復(fù)雜的樣品中捕獲及富集目標(biāo)蛋白，同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

CoIP原理圖

當(dāng)無法進行體內(nèi)互作檢測或無法獲得在體樣本或者在體樣本沒有特異性一抗可以使用但是又必須進一步驗證蛋白互作結(jié)論時，可用到GST pull down實驗；

總結(jié)

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