做了這么多年的分子實驗，對于其中的工具酶大家都了解嗎？他們的作用原理都知道嗎？本期Absin分子小課堂小愛要教大家如何分清這些復雜的酶。
工具酶是一類在DNA重組過程中，用于不同DNA分子的制備、切割、修飾、擴增、核酸分子的標記以及核苷酸序列測定的酶的統(tǒng)稱，是基因重組技術所需的工具。根據(jù)催化反應特性可分為限制性內(nèi)切酶、聚合酶、連接酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等多種類型。
限制性內(nèi)切酶
限制性內(nèi)切酶主要從原核生物中發(fā)現(xiàn)，以內(nèi)切方式水解核酸中磷酸二酯鍵，對外源性的DNA進行切割、水解，被稱為“基因剪刀"。限制酶來源于細菌的“限制—修飾"系統(tǒng)，最早發(fā)現(xiàn)于20世紀60年代末。根據(jù)限制酶的結(jié)構與作用方式，可將其分為Ⅰ類限制酶(TypeⅠ)、Ⅱ類限制酶(TypeⅡ)和Ⅲ類限制酶(TypeⅢ)3種類型。其中，Ⅱ類限制酶識別切割位點比較專一，且不具有甲基化酶的活性，在DNA重組中被廣泛應用。
愛必信擁有不同的TypeⅡ型限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品：
產(chǎn)品優(yōu)勢：
1、快速：5-15min內(nèi)即可完成酶切；
2、便捷：共用一種酶切Buffer，簡化酶切體系；
3、兼容性高：在不同緩沖液中均具有很高活性；
4、良好酶活冗余度，輕松應對底物過量或困難模板酶切。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs60200 | 快速內(nèi)切酶ApaLI | 200T |
abs60201 | 快速內(nèi)切酶AscI | 50T |
abs60202 | 快速內(nèi)切酶AvrII | 25T |
abs60203 | 快速內(nèi)切酶BamHI | 500T |
abs60204 | 快速內(nèi)切酶BclI | 125T |
abs60205 | 快速內(nèi)切酶BglII | 100T |
abs60206 | 快速內(nèi)切酶BsaI | 50T |
abs60207 | 快速內(nèi)切酶BstBI | 100T |
abs60208 | 快速內(nèi)切酶BstEII | 100T |
abs60209 | 快速內(nèi)切酶ClaI | 50T |
DNA連接酶
DNA連接酶主要用于基因工程中，將由限制性核酸內(nèi)切酶“剪"出的粘性末端重新組，故也稱“基因針線"。作用原理為DNA連接酶催化雙鏈DNA鏈一條鏈上切口的連接，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-Po4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵。T4 DNA連接酶是ATP依賴的DNA連接酶，可催化雙鏈DNA的粘性末端、平末端及RNA-DNA雜合體中單鏈的連接，在分子生物學中有廣泛的應用。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 特點 |
abs60084 | T4 DNA Ligase | 500U | 該酶不僅能夠催化雙鏈DNA的平末端或粘性末端之間的連接，還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA雜交雙鏈中的單鏈切刻。 |
DNA聚合酶(DNA polymerase)
DNA聚合酶以DNA為復制模板，從將DNA由5'端點開始復制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具備模板、引物、dNTP等的情況下）及其相輔的活性。實驗室常用的DNA聚合酶有普通耐熱型Taq DNA聚合酶、高保真型DNA聚合酶。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs60251 | 重組高熱穩(wěn)定DNA聚合酶 | 1000U |
abs60036 | 2×Taq PCR Mix | 1mL*5 |
abs60056 | 2×Pfu Master Mix | 1mL*5 |
abs601511 | 2 × 預混實時熒光定量快速PCR反應體系 | 1.7mL*3 |
逆轉(zhuǎn)錄酶
逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶）又稱為依賴RNA的DNA聚合酶。該酶以RNA為模板，以dNTP為底物，根據(jù)堿基配對的原則，按5'-3'方向合成一條與RNA模板互補的DNA單鏈，這條DNA單鏈叫做互補DNA (complementary DNA, CDNA)。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品特點 |
abs60073 | Reverse Transcriptase | 10000U | 本酶的RNase H活性缺失，延伸能力強，可用于較長的cDNA合成，高比例的全長cDNA文庫的構建以及Real Time RT-PCR反應等。 |
核酸酶
核酸酶主要有三類，分別是：
1、脫氧核糖核酸酶(DNase)：DNase只能水解DNA的磷酸二酯鍵。胰DNasel可切割雙鏈和單鏈DNA，產(chǎn)物為5’-磷酸寡核首酸，牛脾DNasell降解DNA則產(chǎn)生3’-磷酸為未端的寡核苷酸；
2、核糖核酸酶(RNase)：將RNA降解為小片段的核酸酶；
3、非特異性核酸酶：將DNA、RNA都可進行水解。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs60539 | 脫氧核糖核酸酶Ⅰ | 1KU |
abs47047435 | 脫氧核糖核酸酶Ⅰ(牛胰) | 100mg |
abs9330 | 核糖核酸酶A | 150uL |
abs44075580 | 核糖核酸酶A | 50mg |
abs60326 | DNase–Free RNA酶A | 1mL |
abs60157 | 全能核酸酶 | 10KU |
其他酶
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品描述 |
abs60248 | 雙鏈DNA酶 | 50T | dsDNase也是一種核酸內(nèi)切酶，能夠特異性的消化雙鏈DNA而不會消化單鏈DNA |
abs60340 | PfAgo核酸內(nèi)切酶 | 200U | PfAgo核酸內(nèi)切酶可在5’磷酸化的guide DNA引導下精準剪切單鏈DNA底物 |
abs9118 | 蛋白酶K | 1g | 主要應用于基因診斷試劑盒、基因組DNA提取試劑盒、RNA提取試劑盒中去除核酸酶和其它蛋白污染 |
FAQ：
1、限制性內(nèi)切酶無法切割DNA有哪些原因？
a. 內(nèi)切酶失活：用標準底物檢測酶活性；
b. DNA不純，含有SDS、酚、EDTA等內(nèi)切酶抑制因子：將DNA過柱純化，乙醇沉淀DNA；
c. 條件不適（試劑、溫度）：檢查反應系統(tǒng)是否最佳；
d. DNA不存在該酶識別序列：換用其它的酶切割DNA或過量酶消化驗證。
2、酶切后的DNA片段連接效率低？
a. 含磷酸鹽的濃度高：透析，乙醇沉淀去除磷酸鹽；
b. 內(nèi)切酶失活或含有ATP酶：更換內(nèi)切酶；
c. 平末端連接：加大T4 DNA Ligase用量；
d. 連接緩沖液不合適：重新配制連接緩沖液。
3、脫氧核糖核酸酶I(abs60539)濃度、體積怎么換算？用于組織的解離該怎么用？
對于濃度、體積計算：本產(chǎn)品規(guī)格為1KU，酶活濃度是5U/mL，總體積則為200uL。根據(jù)說明書最后一個表格計算酶體積用量：例如1ugRNA，相應所需酶就是1U，1KU/1U=200uL/需要體積，最后計算得到0.2uL。對于動物組織解離，可以適用，具體操作步驟及使用量可參考網(wǎng)絡文獻。
4、pfAgo核酸內(nèi)切酶buffer是否含有金屬離子？
Buffer中不含金屬離子，對于擴增反應沒有任何影響。一般PfAgo酶可以兼容絕大多數(shù)PCR buffer，但普通Taq酶不兼容PfAgo buffer。
5、pfAgo核酸內(nèi)切酶和Ago核酸內(nèi)切酶（微球）有哪些差別？
兩者狀態(tài)不一樣、保存條件不一樣；檢測方法、使用的效果幾乎一樣。
名詞解釋：
酶活性單位：在一定溫度、PH及離子強度下，1h內(nèi)酶解（切割）特定底物DNA，所需酶的量。采用國際單位（IU，簡寫為U）來統(tǒng)一表示酶活性的大小。
酶活性濃度：以每單位體積所含的酶活性單位數(shù)表示。目前幾乎都習慣用U/L來表示液體中酶活性濃度。
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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