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愛必信(上海)生物科技有...

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工具篇 | mRNA標準品應用案例展示

閱讀:1062      發(fā)布時間:2024-2-1
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背景介紹:

 

疫情mRNA疫苗的成功開發(fā)使得mRNA技術得到重要的關注。mRNA技術作為一種通用性技術,其研發(fā)路徑和生產工藝顯著區(qū)別于傳統(tǒng)的生物醫(yī)藥研發(fā)模式,有望在傳染病疫苗、腫瘤疫苗、免疫治療、蛋白替代療法、治療性抗體等多個領域得到廣泛應用,是醫(yī)藥研發(fā)進入新紀元。

 

在對于核酸藥物遞送系統(tǒng)研究、蛋白表達的療效研究以及mRNA藥物研發(fā)中工具mRNA起到非常重要作用,那么大家知道什么是工具mRNA,它的作用是什么呢?

 

什么是工具mRNA?

 

工具mRNA(mRNA標準品)即成品的標準型信使核糖核酸(類似于大家分子實驗中常用的成品質粒)。用戶購買后無需對mRNA標準品進行任何處理,可直接應用于相應實驗。

 

愛必信擁有一系列的線性、環(huán)狀工具mRNA。其中線性mRNA采用化化學合成的Cap1帽結構,使線性mRNA具有高比例的天然帽子結構,修飾堿基 (N1-Methylpseudo-UTP、Pseudo-UTP、5-Methoxy-UTP、5-Methyl-CTP、N6-Methyl-ATP) 有5種可供選擇,同時使用優(yōu)化了適用于哺乳動物細胞的密碼子、UTR、polyA結構。環(huán)狀mRNA通過體外轉錄生成并環(huán)化,繼而分離純化得到成品。

 

工具mRNA分類:

 

1、報告基因類

 

報告基因類mRNA常用于細胞轉染、翻譯效率、藥物遞送、體內成像等研究。其中愛必信EGFP mRNA是一種常用的示蹤蛋白mRNA,熒光穩(wěn)定性強,用于表達加強的綠色熒光蛋白(分離自水母),發(fā)射波長為509nm,可通過熒光顯微鏡或者流式細胞術檢測,是觀察mRNA遞送、翻譯的理想工具。

 


貨號

產品名稱

規(guī)格

abs60176

EGFP mRNA

100ug

abs60178

Fluc mRNA

100ug

abs60180

mcherry mRNA

100ug

abs60192

EBFP mRNA

100ug

abs60332

Endless  eGFP mRNA

100ug

abs60333

Endless  Fluc  mRNA

100ug

abs60334

Endless  mcherry mRNA

100ug




圖 EGFP mRNA Agarose電泳條帶


圖 HEK293細胞轉染EGFP mRNA 24h后表達效果

 

愛必信還擁有其他報告基因類工具mRNA如tdTomato mRNA、YFP mRNA、mBanana mRNA等熒光蛋白mRNA,可用于對照驗證實驗,大家如有需要歡迎來詢。

 

2、基因編輯類

 

CRISPR/Cas9是*基因編輯系統(tǒng),被廣泛用于治療各類疾病。Cas9 mRNA可在細胞內瞬時表達Cas9蛋白,能減少免疫反應和脫靶風險。

 

貨號

產品名稱

規(guī)格

abs60174

Cas9 mRNA

100ug

abs60191

Cre mRNA

100ug

abs60335

Endless  Cas 9 mRNA

100ug

 





3、免疫抗原類

 

免疫抗原類mRNA是腫瘤免疫療法的理想研究工具。卵白蛋白 (OVA) 是絲狀蛋白超家族的一員,是在蛋清中發(fā)現(xiàn)的主要糖蛋白。是一種常用的免疫和生化研究抗原,是一種已建立的氣道高反應性模型過敏原,可激活細胞免疫和體液免疫。

 

貨號

產品名稱

規(guī)格

abs60312

OVA mRNA

100ug

 




4、蛋白替代類

 

EPO mRNA用于表達人源EPO蛋白 (human erythropoietin) 。我們使用 (Abs CapTM) 在體外轉錄生產了EPO mRNA,化學合成的Cap1結構使其具有高比例的天然的mRNA帽子結構,從而獲得高效的表達效果。

 


貨號

產品名稱

規(guī)格

abs60194

EPO mRNA

100ug

abs60336

Endless  EPO mRNA

100ug




 

工具mRNA產品特征:

 


濃度

1mg/mL

狀態(tài)

溶劑,1mM Sodium Citrate,pH 6.4

儲存溫度

建議分裝,低于-40℃保存,避免反復凍融

效期

建議在2個月內使用完





工具mRNA產品優(yōu)勢:

 

1、Cap1型帽結構,提高mRNA穩(wěn)定性及翻譯效率,更適合哺乳動物;
2、5種修飾可供選擇,加入修飾堿基可提高翻譯效率,降低免疫原性;
3、合適的PolyA尾結構,保證mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率;
4、完整性高,質控嚴格,方便研究和應用。

 

用戶實驗案例1:

 

用核酸轉染試劑盒(abs60259)轉染mCherry mRNA至HEK293細胞24h、48h,在熒光顯微鏡下觀察到的紅色熒光穩(wěn)定且信號強。(具體實驗操作可參考核酸轉染試劑盒(abs60259)實驗操作步驟)


圖 轉染mCherry mRNA 24h后的熒光


圖 轉染mCherry mRNA 48h后的熒光

 

用戶實驗案例2

 

用mRNA轉染試劑(abs60339)在不同類型細胞中轉染線性工具mRNA—EGFP mRNA,處理細胞24h后利用熒光顯微鏡拍照,各種細胞都呈現(xiàn)較強的綠色熒光。


圖 轉染EGFP mRNA于不同類型細胞中

 

用戶實驗案例3

 

注射線性Luciferase mRNA至活體小鼠體內,小鼠體重150ug,每針注射20uL,共計3針,3天后進行活體成像。


圖 Luciferase mRNA注射小鼠后活體成像

 

FAQ:

 

1、工具mRNA保存條件是什么?

A:需要低于-40°C保存,-80℃冰箱或液氮保存都可以,愛必信所提供的均為新鮮生產的產品,為了達到最佳使用效果,請在收到貨物的2個月內使用。若不小心將mRNA短期(例如1天)存放于-20℃,可以在正式實驗之前將mRNA跑瓊脂糖凝膠電泳看其是否降解。

 

2、工具mRNA是什么狀態(tài)?

A:我司的工具mRNA是液體狀態(tài),通用溶劑一般是1mM檸檬酸鈉鹽溶液,pH為6.4。

 

3、工具mRNA的貨期有多久?

A:我公司工具mRNA均為新鮮生產產品,我們收到訂單后會立即安排生產、發(fā)貨。一般貨期為1-2周。

 

4、工具mRNA的純度能達到多少?

A:線性mRNA可達到90%的純度;環(huán)狀mRNA如果長度是3-5k,可達到科研級別純度,通常能達到85%的純度。環(huán)狀mRNA序列越長,關環(huán)效率越低,純化難度越高。

 

5、工具mRNA推薦的帽結構是哪一種?

A:Cap1 AG。加帽率高達95%。

 

6、我所需要的工具mRNA在沒有找到,怎么辦?

A:目前市面上常規(guī)的mRNA標注品類目我公司都是有的。若我司的工具mRNA類別中沒有您所需的mRNA,您可以選擇我公司的定制合成服務,我們?yōu)槟O計合成特定的mRNA。

 

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貨號

產品名稱

規(guī)格

abs60259

核酸轉染試劑盒

1.5mL

abs60339

mRNA轉染試劑

1mL

abs7119

1.5mL離心管(無菌無酶)

10盒/箱

abs7075

200uL吸頭(盒裝,無菌無酶)

100盒/箱





 


Absin特色產品線:

WB相關:ECL發(fā)光液、預染marker、預制膠;IHC相關:二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體;定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

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