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二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，根據(jù)實驗需求，二抗上通常連有酶或熒光素等標簽。由于二抗所具備的優(yōu)點使得其在免疫學實驗中得以廣泛應用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節(jié)省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。
 

二抗，廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同樣的，在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從以下幾個方面考慮：
 

1.一抗的種屬來源

根據(jù)一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。例如：一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。
 

2.一抗的類別亞型

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會在產(chǎn)品說明書中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相應的二抗就應當是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，或者你也可以選擇專門針對這一亞型的二抗。此種抗體在雙標記實驗中尤其合適。

3.二抗的偶聯(lián)標記

一般來講，偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP）、熒光基團、生物素、金顆粒等。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。WB、ELISA和IHC常用的二抗通常是酶標二抗（部分熒光WB需選用遠紅外波長熒光蛋白標記的熒光二抗），而免疫熒光、流式等實驗中通常使用熒光基團標記的二抗，而金顆粒標記的二抗則更多的應用于免疫電鏡中。 還有一些需要更大程度地放大信號的免疫實驗中，二抗則可以選擇biotin/avidin體系的二抗或無偶聯(lián)標記的二抗（再用三抗放大）。
 

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