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● 凋亡簡介

細胞死亡有兩種不同的方式：凋亡和壞死。在正常組織中，不需要的細胞可以發(fā)生主動而自發(fā)的死亡，這種細胞的程序性死亡也被稱為細胞凋亡。與壞死不同，細胞凋亡不伴炎癥反應，細胞被快速清除而不影響組織的整體功能，是真核細胞死亡zui常見的形式。兩者可根據(jù)死亡細胞的形態(tài)、生物化學改變等的不同而加以鑒別。細胞凋亡在調(diào)控細胞數(shù)量上發(fā)揮與增值相反的作用，和分化、增值協(xié)調(diào)作用，保持機體正常生存和動態(tài)平衡*的兩個方面。正常的細胞凋亡在許多生理過程中包括免疫系統(tǒng)成熟和效應機制、組織、器官和四肢胚胎發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育以及激素依賴的組織重塑等都是必需的。

● 凋亡異常的相關的疾病

許多因素都可以誘發(fā)細胞發(fā)生凋亡，如：某些細胞被剝奪其生存依賴的細胞因子（如IL-3、促紅細胞生成素）或TNF、Fas等死亡受體被激活后都可誘發(fā)凋亡；正常細胞在遭遇非生理性刺激（如抗腫瘤藥物、離子輻射）時也發(fā)生凋亡。凋亡紊亂（生理性的細胞凋亡受到抑制或/和病理性的細胞凋亡過度）在許多疾病諸如缺血、中風、心臟疾病、腫瘤、AIDS、自身免疫病、中毒性肝病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性病變等，都起著重要的作用。如：AIDS表現(xiàn)為被HIV感染的CD4⁺T細胞大量凋亡，從而造成獲得性免疫缺陷；另外，某些神經(jīng)退行性疾病也是由于特定的神經(jīng)元細胞發(fā)生凋亡而致；與之相反，凋亡被抑制也對身體造成嚴重的危害。如果自身反應性的B細胞和T細胞不能通過凋亡被清除，就會誘導自身免疫性疾病。癌癥也可以看作是細胞凋亡異常減少的疾病，腫瘤的凈增長就是不斷增加的生長速率與不斷減少的凋亡速率共同作用的結果。各種抗癌藥物、放射都可以觸發(fā)腫瘤凋亡；腫瘤細胞對凋亡的敏感性受幾種癌基因的調(diào)控；凋亡可能是癌癥治療的一種預后標志，腫瘤學上所觀察到的這些凋亡現(xiàn)象已引起人們廣泛而持久的興趣。

● Annexin V-FITC＆PI凋亡檢測試劑盒檢測原理

正常細胞在凋亡過程中，其細胞膜、細胞質、細胞核、核酸以及凋亡相關蛋白都發(fā)生顯著變化，和正?；驂乃兰毎啾染哂絮r明特征，因此，根據(jù)它們在在形態(tài)學、生物化學和分子生物學上的差別，可以用多種檢測方法將三者區(qū)別開來。其中，Annexin V-FITC＆PI雙染法可借助流式細胞儀進行定量檢測，也可以原位染色的定性檢測。因為該方法簡單、便捷、可同時區(qū)分早期和晚期凋亡，因此是目前檢測細胞凋亡和凋亡率的zui常用和廣泛的方法之一。

原理：正常細胞的磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內(nèi)側，而細胞凋亡早期開始，細胞膜的不對稱性發(fā)生顯著改變，即細胞膜中的PS由脂膜內(nèi)側翻向外側。這種變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA片段化。 

Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca²⁺依賴性磷脂存在的環(huán)境結合蛋白，與PS有高度親和力，故Annexin V在有Ca²⁺存在的環(huán)境中可通過細胞外側暴露的PS與凋亡細胞的細胞膜結合。因此Annexin V被稱為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙錠（Propidium Iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜。凋亡晚期的細胞和死亡細胞由于細胞膜的完整性破壞，通透性增加，PI能夠透過細胞膜而使細胞核中核酸染紅。因此將Annexin V-FITC與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。在熒光顯微鏡下，可觀察到細胞的染色情況。在流式細胞儀上，可對正常、早晚期凋亡細胞進行統(tǒng)計學分析。

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