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1384次細胞凍存
1、取待凍存的細胞用胰酶消化，用培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。800r/min離心5min，棄上清收集細胞。如果是懸浮培養(yǎng)的細胞，可直接離心收集細胞。
2、加入適量凍存液(10%甘油+90%培養(yǎng)基，或是10%DMSO+90%培養(yǎng)基)制成細胞懸液。細胞濃度宜大，3*106個/ml左右，并可適量增加小牛血清濃度至20%。
3、細胞懸液裝入凍存管中。用膠布封裹，做好標記(注明細胞種類、時間、條件等)。
4、凍存管在4℃下存放30min，轉放-20℃1.5h~2h，再轉入-70℃4~12h后即可轉入液氮內(-196℃)，注意進行登記。
細胞復蘇
1、取一搪瓷杯盛上適量自來水加熱至40℃左右。
2、從液氮中取出凍存管立即投入40℃水中迅速解凍。
3、取出凍存管，用75%酒精清潔管口，打開。
4、離心去上清收集細胞，用無血清培養(yǎng)基洗1次，加入3ml新鮮培養(yǎng)基，于小培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
5、每日觀察細胞生長情況，如果死細胞較多，復蘇次日應換液。待細胞長滿后進行傳代培養(yǎng)。
注意事項
1、在使用含有DMSO的凍存液時，因為DMSO在室溫狀態(tài)易損傷細胞，所以在細胞加入凍存液后應盡快放入4℃環(huán)境中。
2、準確記錄細胞的種類、凍存時間、凍存液的品種和凍存者信息。
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