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關(guān)于蛋白層析純化系統(tǒng)緩沖液的更換方法分享

閱讀：1491 發(fā)布時間：2020-12-22
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　　蛋白層析純化系統(tǒng)采用高度靈活配置的模塊化設(shè)計，具有許多優(yōu)點來進(jìn)行快速、靈活、穩(wěn)定的純化。
　　硬件的所有閥門、檢測器和層析柱均面向操作者安裝，方便清楚、直觀地了解各個模塊之間的關(guān)系和樣品以及緩沖液的流路。
　　將樣品環(huán)上樣改進(jìn)為直接上樣，入口可實現(xiàn)系統(tǒng)和層析柱的自動清洗。從一個純化任務(wù)轉(zhuǎn)向另一個純化任務(wù)僅僅需要幾分鐘，在保持準(zhǔn)確性和確保重復(fù)性的同時，大大地節(jié)省制備時間。
　　蛋白層析純化系統(tǒng)緩沖液的更換方法：
　　雖然更換緩沖液不能提高蛋白純度，但它卻在蛋白純化方案中起著極其重要的作用。不同的蛋白純化方法需要不同pH及不同離子強(qiáng)度的緩沖液。
　　假如你用硫酸銨將蛋白沉淀出來，毫無疑問蛋白是處在高鹽環(huán)境中，需要想辦法脫鹽，可用的方法有利用半透膜透析，通過勤換透析液體去除鹽分，此法尚可，但需幾個小時，通常要過夜，也難以用予大規(guī)模純化中。
　　新型的設(shè)備將透析膜夾在兩個板中間，板的一側(cè)加緩沖液，另一側(cè)加需脫鹽的蛋白溶液，并在蛋白溶液一側(cè)通過泵加壓，可以使兩側(cè)溶液在數(shù)小時內(nèi)達(dá)到平衡，若增加對蛋白溶液的壓力，還可迫使水分和鹽更多通過透析膜進(jìn)入透析液達(dá)到對蛋白濃縮的目的。
　　也有出售的脫鹽柱，柱內(nèi)的填料是小孔徑的顆粒，蛋白分子不能進(jìn)入孔內(nèi)，先于高濃度鹽離子從柱中流出，從而使二者分離。
　　蛋白層析純化系統(tǒng)的每一步都會造成目的蛋白的丟失，緩沖液平衡的步驟尤甚。蛋白會結(jié)合在任何它能接觸的表面上，剪切力、起泡沫和離子強(qiáng)度的快速變化很容易讓蛋白失活。

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