蛋白質(zhì)定氮儀

1. 儀器安裝：

將配件中的硅膠管根據(jù)實際需求剪成不同的長度，按照上面左側(cè)示意圖連接好（注意接緊，防止漏水）。蒸餾水進口和堿液進口的硅膠管另一端必須浸泡在所對應(yīng)的液面以下。蒸餾水出口和冷卻水出口的硅膠管另一端放入排水池（桶）。冷卻水進口連接自來水龍頭。在儀器正面左側(cè)托盤上安放空的消化管，右側(cè)放錐形瓶，插入帶橡皮塞的玻璃嘴。

2. 儀器檢測：

⑴．打開冷卻水（水龍頭開關(guān)），注意流量，控制在3-4L/分鐘。接上電源線，打開電源總開關(guān)。儀器開始自動加水，從側(cè)面燒杯水位觀測口可以看見燒杯內(nèi)的水位上升，一段時間后會自動停止加水（由系統(tǒng)內(nèi)水位探針自動控制，水位不足會持續(xù)加水）。

⑵．打開加堿按鈕，加堿量大概在30mL左右時，關(guān)閉加堿按鈕.接著打開蒸餾按鈕，儀器開始蒸餾。儀器工作10分鐘左右（錐形瓶內(nèi)液體在100-150mL左右），關(guān)閉蒸餾按鈕（燈熄滅），儀器停止蒸餾，整機檢測完成。

3. 實驗蒸餾：

在消化管托盤上換上已消化完成并冷卻稀釋后(一般加20ml蒸餾水稀釋)的樣品，右側(cè)換成準備好的錐形瓶（錐形瓶內(nèi)加入50ml硼酸和4-5滴混合指示劑，具體硼酸量由各自實驗情況確定），調(diào)整氨氣回流玻璃嘴和瓶塞，使玻璃嘴浸泡在硼酸液面以下。

然后先打開加堿按鈕，加到自己所需要的堿的用量后（確保液體顏色變黑為止），關(guān)閉加堿按鈕。然后再打開蒸餾按鈕。

蒸餾即將完成時（一般蒸餾時間8-12分鐘左右，錐形瓶內(nèi)液體在150-200ml左右），提起橡皮塞，移開錐形瓶，使氨氣回流玻璃嘴離開液面，用蒸餾水沖洗玻璃嘴外壁，繼續(xù)蒸餾10秒鐘后，關(guān)閉蒸餾按鈕，取下錐形瓶待滴定用。

注意：更換樣品蒸餾時不需要關(guān)閉電源總開關(guān)。

4．滴定/計算（以下數(shù)據(jù)僅供參考，以本行業(yè)標準為主）

用0.05mol/LHCL滴定接收瓶內(nèi)的溶液，滴定至（暗）灰色時為止，記下消耗HCL的毫升數(shù)，按下列式子計算蛋白含量：

蛋白質(zhì)%＝

式中： V₁—樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積，ml；

      V₂—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準液的體積，ml；

      N—硫酸或鹽酸標準溶液當量濃度；

      0.014—1N硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當于氮克數(shù)；

      m—樣品的質(zhì)量（體積），g（ml）；

         F—蛋白質(zhì)系數(shù)，按16%計算乘以6.25即為蛋白質(zhì)。

        (空白測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定)

5. 清洗/關(guān)機

先換上空的消化管和錐形瓶，把連堿進口的硅膠管換成新的一個硅膠管，另一端放入蒸餾水容器內(nèi)，然后按蒸餾按鈕，用蒸餾水清洗堿泵，一般30秒鐘左右后取下堿進硅膠管，排空堿路里面的液體。

然后關(guān)閉冷卻水（自來水龍頭），打開蒸餾水排水開關(guān)，排完蒸餾水。最后關(guān)閉總電源開關(guān)，拔掉電源線。（最后一天實驗做完后必須進行關(guān)機清洗操作）。

蛋白質(zhì)定氮儀 

試劑/樣品準備

1. 儀器和工具

a.分析天平：感量0.0001g

b.酸式滴定管：25ml或10ml

c. 錐形瓶:容積250ml

d. 消化管：300ml（消化爐標配中有）

2.試劑

a． NaOH溶液：化學(xué)純，按標注方法配制成40%濃度水溶液（m/v）

b．硼酸（H₃BO₃）：分析純，按標注方法配制成2%濃度水溶液（m/v）

c. 鹽酸（HCL）：分析純，0.05mol/L標準液，用碳酸鈉法標定鹽酸

d．混合指示劑：甲基紅（G₅H₅N₃O₂）溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠溶于乙醇配成0.5%乙醇溶液，二種溶液等體積混合陰涼處保存（保存期三個月）。

3.樣品

將消化爐消化完成并且冷卻后的樣品稀釋后進行實驗。（消化取樣注意：稱取0.20g～2.00g固體試樣或2.00g～5.00g半固體試樣或吸取10.00ml～25.00ml液體試樣（約相當?shù)?/span>30mg～40mg），進行消化。）