甘油檢測(cè)試劑盒：甘油是一種非常重要的物質(zhì)，廣泛的應(yīng)用于工業(yè)生物試劑中，在食品工業(yè)中，常被作為保濕劑、增香劑和增色劑等使用，以改良食品的質(zhì)量。甘油是釀酒酵母發(fā)酵過程中的副產(chǎn)物,也是灰質(zhì)葡萄孢新陳代謝過程中的一個(gè)重要產(chǎn)物，甘油是高品質(zhì)果酒的一個(gè)成分，高品質(zhì)的葡萄汁中不含有(或只含有痕量或微量)甘油，濃度大約為1%(v)，若葡萄汁中含有甘油則意味著產(chǎn)品中使用了品質(zhì)不好的原料。甘油也常常作為潤(rùn)滑劑用在洗滌液、乳酪和牙膏中，在制煙工業(yè)中，通過通常是預(yù)先向煙葉上噴灑甘油以保障不會(huì)粉碎的目的。 

適用范圍：測(cè)定血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

組成 ：  

R1試劑 40 ml

R2試劑 10 ml     

4 mmol/L甘油標(biāo)準(zhǔn)品1 ml

4 oC，儲(chǔ)存3個(gè)月。

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計(jì)。佳工作波長(zhǎng)550nm，如無此波長(zhǎng)建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。

操作步驟：

一 樣本處理：

酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進(jìn)行測(cè)定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再測(cè)定。

培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，如有細(xì)胞碎片應(yīng)4oC,，12,000g離心5min,取上清進(jìn)行測(cè)定。

血液：新鮮抗凝血，4oC，2,000g離心5min得到血漿；非抗凝血，先4oC靜置2h得到血清后，2000g離心10min,除去血細(xì)胞。將得到的血漿/血清70oC 加熱10分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g離心10min ,取上清測(cè)定或-20oC保存。

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合，立即使用或4oC保存<1天，變色棄去。

三 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4 mM甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設(shè)置0濃度對(duì)照反應(yīng)管。

四 甘油濃度測(cè)定：

參見下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致，減小實(shí)驗(yàn)誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí)，可將待測(cè)樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進(jìn)行測(cè)定，但是如果樣品體積超過100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度，使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過線性范圍，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計(jì)算樣品中甘油濃度。）

37oC或25oC反應(yīng) 10分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測(cè)定各管OD值。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。

附Excel作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)Вx擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2值-。

甘油檢測(cè)試劑盒