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RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)其他

所  在  地南京市

更新時間:2024-03-06 13:33:36瀏覽次數(shù):633次

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RIPA裂解液(組織/細(xì)胞),是一種主要用于從動物組織和動物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白的試劑。

RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)

產(chǎn)品名稱 RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)

產(chǎn)品規(guī)格】 20ml /100ml

儲存條件 RIPA裂解液4℃保存,PMSF -20℃保存

有效期 12個月 

產(chǎn)品簡介

RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)是一種主要用于從動物組織和動物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白的試劑

RIPA 組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細(xì)胞膜(包括核膜)。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。

 

本產(chǎn)品僅供科研實驗用,不做其它用途!

 

使用說明

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據(jù)使用量,取每1mL RIPA加入10uL PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM,混勻備用(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液,用手指輕彈懸浮細(xì)胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品:把組織-剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

注意事項

本試劑為強烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時,也會將基因組一并釋放出來,若細(xì)胞量多會造成細(xì)胞裂解液粘稠:此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測定濃度,可加入少量 SDS(1%),煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford 蛋白濃度測定試劑盒,請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。

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RIPA裂解液(組織/細(xì)胞) 

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