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核酸提取之磁珠法篇
閱讀：4179發(fā)布時(shí)間：2022-3-18
隨著分子生物學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展，以核酸雜交、核酸擴(kuò)增及核酸序列分析為代
表的分子診斷和檢測(cè)技術(shù)在諸多領(lǐng)域中日益凸顯出至關(guān)重要的作用。樣本處理為分子診斷實(shí)驗(yàn)的“第一步"，也是最關(guān)鍵的一步，其獲得的核酸質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響到下游分子生物學(xué)試驗(yàn)的成敗。
核酸提取傳統(tǒng)方式：
傳統(tǒng)的提取方法主要有：酚抽提法、親和層析柱、密度梯度離心和硅膠柱法。
這些傳統(tǒng)提取方法可從不同組織樣本中分離出DNA和RNA，但這些技術(shù)中包含沉淀和離心等操作步驟，其所需的生物樣本量較大，提取步驟較為繁雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，得率也不高，難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作，另外，大部分的傳統(tǒng)方法中還需要用到有毒化學(xué)試劑，對(duì)操作人員的健康具有潛在危害，因此，伴隨著分子生物學(xué)以及材料學(xué)的發(fā)展，采用磁珠的方法從液相系統(tǒng)中分離純化核酸的新方法已經(jīng)崛起。
磁珠法提取核酸的出現(xiàn)：
磁珠是利用高分子材料或者生物分子包被四氧化三鐵核心而形成的可以被磁鐵吸附的同時(shí)納米或微米小球。用于核酸純化的磁珠表面功能基團(tuán)一般為羥基（OH）和羧基（COOH）。
磁珠分離核酸核心技術(shù)是固相可逆固定化技術(shù)，但磁珠和核酸具體是如果相互作用吸附在一起，目前還不是很清楚，鹽橋理論是其中猜想之一。在利用磁珠結(jié)合核酸的體系中，由于緩沖液的作用核酸分子（DNA&RNA）會(huì)由線性變成球狀，暴露出核酸骨架上大量的負(fù)電基團(tuán)與反應(yīng)體系中的陽(yáng)離子連接，在磁珠外層負(fù)的作用下，形成“陰離子-陽(yáng)離子-陰離子"的鹽橋結(jié)構(gòu)，使核酸分子被特異性地吸附到磁珠表面。而當(dāng)反應(yīng)緩沖液被棄除后，加入水性分子，會(huì)快速充分水化核酸分子，解除三者之間的離子相互作用，使吸附到磁珠上的核酸分子被純化出來(lái)。
磁珠法具有其它DNA提取方法不可比擬的優(yōu)勢(shì)：
（1）樣本需求量低：核酸提取體系可簡(jiǎn)單放大和縮小，微量的材料即可提到高濃度的核酸；
（2）操作簡(jiǎn)單快速：整個(gè)操作流程基本分為五步（裂解、結(jié)合、洗滌、干燥、洗脫），手動(dòng)操作可以30-40min完成，無(wú)需離心。
（3）全自動(dòng)化操作：采用核酸提取儀可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、高通量操作，一鍵啟動(dòng)，即可實(shí)現(xiàn)幾十甚至幾百個(gè)樣品的提取，全過(guò)程最短9min可實(shí)現(xiàn)；
（4）安全無(wú)毒無(wú)害：試劑不含酚、氯仿等有毒化學(xué)試劑，*符合現(xiàn)代化環(huán)保理念。
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