水性C18色譜柱通用使用指南

閱讀：591發(fā)布時(shí)間：2024-6-20

水性C18色譜柱是一種專門設(shè)計(jì)用于在高水相流動相條件下工作的反相高效液相色譜（HPLC）柱。它通常用于極性和親水性化合物的分離。以下是水性C18色譜柱的通用使用指南：

1.色譜柱的安裝

檢查與連接：在安裝前確保色譜柱處于良好狀態(tài)，沒有損壞。使用適配器將色譜柱牢固地連接到HPLC系統(tǒng)中，確保無泄漏。

沖洗：在初次使用或長時(shí)間不使用之后，應(yīng)使用純?nèi)軇ㄈ缂状蓟蛞译妫_洗色譜柱，通常以0.5-1.0mL/min的流速進(jìn)行15-30分鐘的沖洗。

2.流動相的選擇與制備

高水相流動相：由于這是水性C18色譜柱，應(yīng)使用高水相比例的流動相，典型的是80%以上的水相。常用的水相包括純水、含有少量緩沖鹽的水溶液（如磷酸鹽緩沖液）。

有機(jī)相助溶劑：常用的有機(jī)相助溶劑包括乙腈或甲醇。根據(jù)目標(biāo)化合物的極性，調(diào)整有機(jī)相比例。

pH調(diào)節(jié)：對于大多數(shù)分析物，流動相的pH值應(yīng)該控制在色譜柱能夠承受的范圍內(nèi)（通常為2-8），并且應(yīng)盡量接近中性以保護(hù)色譜柱。

3.樣品制備

樣品溶劑：樣品應(yīng)溶解在流動相中或與流動相相似的溶劑中，以減少峰形變差和拖尾現(xiàn)象。

過濾：樣品溶液應(yīng)通過0.22μm或0.45μm的濾膜過濾，以除去顆粒物，防止堵塞色譜柱。

4.操作條件

流速：一般建議在0.5-1.5mL/min的流速范圍內(nèi)操作，根據(jù)具體分析需求調(diào)整。

柱溫：控制柱溫在20-40°C之間，具體溫度根據(jù)分離效果優(yōu)化。

進(jìn)樣量：為避免柱超載，通常推薦進(jìn)樣量在1-20µL范圍內(nèi)，根據(jù)樣品濃度和柱子尺寸調(diào)整。

5.色譜柱的維護(hù)

清洗：定期用高比例有機(jī)溶劑（如乙腈或甲醇）沖洗色譜柱，尤其是在連續(xù)使用后或更換流動相前。

儲存：短期存放時(shí)，用流動相進(jìn)行沖洗并保持濕潤。長期存放時(shí)，建議用有機(jī)溶劑（如乙腈）沖洗后密封保存。

再生：如果色譜柱性能下降，可以嘗試用梯度沖洗法再生色譜柱，從高水相到高有機(jī)相，再返回高水相，逐步?jīng)_洗。

6.常見問題及處理

柱壓升高：檢查流動相和樣品是否有顆粒物，必要時(shí)更換過濾器或預(yù)柱。也可能需要用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。

峰形變差：檢查樣品溶劑與流動相的匹配性，調(diào)整進(jìn)樣量；確保色譜柱沒有堵塞或老化。

分離度下降：優(yōu)化流動相比例、流速和柱溫，或考慮更換色譜柱。

通過遵循以上指南，可以有效地使用和維護(hù)水性C18色譜柱，確保其最佳性能和長使用壽命。

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