3.2.2 樣品測定
液相色譜條件
色譜柱：反相色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）或相當型號色譜柱。柱溫：40oC。進樣量：20μL。流動相：A為甲醇/水（92:8，v/v），B為異丙醇。流動相洗脫程序：0-18.0 min，0%B（流速為1mL/min）；18.1-32.0min，100%B（流速為0.5mL/min）；32.1-42.0min，0%B（流速為1mL/min）。
質(zhì)譜條件
離子源：APCI源。噴霧器溫度：500oC。干燥氣溫度：350oC。鞘氣壓力：50arb。輔助氣壓力：2rb。電暈電流：8μA。選擇性離子監(jiān)測（SIM）：C16:0-GE為m/z 313.3，C18:0-GE為m/z 341.2，C18:1-GE為m/z 339.4，C18:2-GE為m/z 337.3，C18:3-GE為m/z 335.3。
根據(jù)縮水甘油脂肪酸酯工作溶液的濃度及其峰面積，繪制標準曲線。
3.2.3 方法學驗證
3.2.3.1 標準曲線及相關(guān)系數(shù)
以標準工作液濃度（c）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標做標準曲線并計算相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如表1所示。
表1 縮水甘油脂肪酸酯的標準曲線方程及相關(guān)系數(shù)
縮水甘油酯
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線性范圍（ng/mL）
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標準曲線方程
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R2
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C16:0-GE
|
5~200
|
y=241614x-208371
|
0.9999
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C18:0-GE
|
5~200
|
y=124722x-76195.4
|
0.9997
|
C18:1-GE
|
10~400
|
y=268901x-1295670
|
0.9994
|
C18:2-GE
|
10~400
|
y=217331x-559031
|
0.9999
|
C18:3-GE
|
5~200
|
y=138762x-173831
|
0.9996
|
3.2.3.2 方法回收率及精密度實驗
取GE含量都低于低檢出限的樣品作為基質(zhì)，稱取1.00g，加入100μL C16:0-GE、C18:0-GE、C18:3-GE濃度為100ng/mL同時C18:1-GE、C18:2-GE濃度為200ng/mL的標準混合溶液，按照前述方法處理和分析樣品，計算回收率（如表2所示），平均加標回收率為96.25%~106.18%，RSD為2.87%~5.32%，回收率和精密度都能滿足分析要求。
表2 加標回收率和精密度試驗結(jié)果（n=3）
|
C16:0-GE
|
C18:0-GE
|
C18:1-GE
|
C18:2-GE
|
C18:3-GE
|
1
|
109.20
|
105.10
|
101.28
|
101.84
|
103.10
|
2
|
103.11
|
96.52
|
95.06
|
93.36
|
93.20
|
3
|
106.23
|
104.15
|
92.42
|
94.57
|
101.30
|
平均回收率（%）
|
106.18
|
101.92
|
96.25
|
96.59
|
99.20
|
RSD（%）
|
2.87
|
4.61
|
4.73
|
4.75
|
5.32
|
在AOCS標準方法的比對驗證實驗中，共有25家實驗室參加、且均提交兩組平行實驗結(jié)果，取平均值后與我們提交的結(jié)果對比見表3。結(jié)果顯示，本實驗室的檢驗結(jié)果與比對檢測結(jié)果平均值非常接近。
表3檢測結(jié)果對比
|
|
C16:0-GE
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C18:0-GE
|
C18:1-GE
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C18:2-GE
|
C18:3-GE
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總含量
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樣品1
|
檢測結(jié)果
|
5.62
|
4.64
|
5.95
|
5.69
|
5.52
|
27.42
|
平均值
|
5.32
|
5.01
|
5.94
|
5.78
|
5.86
|
27.96
| |
樣品2
|
檢測結(jié)果
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
平均值
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
|
N.D
| |
樣品3
|
檢測結(jié)果
|
2.50
|
0.44
|
5.64
|
1.43
|
N.D
|
10.00
|
平均值
|
2.72
|
0.36
|
6.08
|
1.68
|
N.D
|
10.85
|
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