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強(qiáng)干擾樣品中的內(nèi)毒素檢測(cè)方法
閱讀：454 發(fā)布時(shí)間：2023-4-20
注射類藥物產(chǎn)品的內(nèi)毒素污染可導(dǎo)致嚴(yán)重后果，包括發(fā)燒、敗血癥和敗血性休克。因此，內(nèi)毒素檢測(cè)已成為注射類處方藥、醫(yī)療器械生產(chǎn)和質(zhì)量控制的必要檢測(cè)。
鱟試劑（LAL) 檢測(cè)是內(nèi)毒素評(píng)估的最佳成熟檢測(cè)方式1)。其主要采用鱟的變形細(xì)胞提取物與待檢測(cè)內(nèi)毒素污染樣品進(jìn)行孵育，如果分析樣品中存在內(nèi)毒素，則會(huì)形成凝塊。傳統(tǒng)的LAL檢測(cè)方法是定性的凝膠法。隨后，開發(fā)了定量LAL檢測(cè)方法，包括顯色法和濁度法。
LAL檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性已得到證實(shí)。然而，被測(cè)產(chǎn)品、檢測(cè)劑成分、環(huán)境甚至容器相關(guān)的各種因素可能會(huì)導(dǎo)致測(cè)試難以進(jìn)行或出現(xiàn)誤導(dǎo)性結(jié)果，其中包括樣品干擾或內(nèi)毒素掩蔽劑2-4)?？赡芨蓴_LAL檢測(cè)的因素包括化學(xué)抑制劑（如乙二胺四乙酸，EDTA）；變性劑（如濃酸、堿、無機(jī)鹽或有機(jī)溶劑）；堿化乙醇分子；超出最佳范圍的pH值；內(nèi)毒素掩蔽劑（賦形劑、表面活性劑、螯合劑或 N-二甲基氧化胺等物質(zhì)）；或內(nèi)毒素被容器表面吸收1)。對(duì)于醫(yī)療器械，抗凝涂層、重金屬含量或微粒的存在可能會(huì)干擾測(cè)試結(jié)果2)。對(duì)于使用顯色法檢測(cè)的樣品，與 鱟試劑接觸時(shí)，檢測(cè)混合物中的特定顏色也會(huì)干擾測(cè)試結(jié)果1)。對(duì)于用濁度法檢測(cè)的樣品，樣品中的渾濁或懸浮也可能導(dǎo)致干擾1)。
以下整理了內(nèi)毒素檢測(cè)中不同的抗干擾方法，以降低樣品干擾或內(nèi)毒素掩蔽的因素給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來的影響：
◆適當(dāng)稀釋樣品
如果在LAL檢測(cè)過程中沒有干擾或增強(qiáng)效應(yīng)，可以對(duì)未稀釋的樣品進(jìn)行檢測(cè)。如果樣品存在干擾LAL檢測(cè)的成分，則應(yīng)稀釋樣品以減少干擾或增強(qiáng)。建議確定最大稀釋倍數(shù)，保證減少干擾效應(yīng)但仍可進(jìn)行內(nèi)毒素測(cè)定2)。
◆消化、使用緩沖液、過濾或離心
這些都是降低醫(yī)療設(shè)備檢測(cè)干擾的潛在處理方法2)。具體選用哪種操作應(yīng)取決于對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾因素的評(píng)估和對(duì)檢測(cè)條件的驗(yàn)證。
◆保持最佳pH范圍
LAL檢測(cè)的最佳 pH 范圍在6.0–8.0范圍內(nèi)，檢測(cè)條件應(yīng)保持在此范圍內(nèi)以確保結(jié)果一致。
◆保證樣品的均勻性
懸浮樣品可能會(huì)導(dǎo)致干擾問題。因此，應(yīng)盡量保證樣品的均勻性。在這種情況下，不建議混合來自制造過程不同階段的樣品，因?yàn)殡y以確保不同階段產(chǎn)品可以混合均勻2)。
◆調(diào)整混合樣本的最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）
某些情況下，小體積單位的成品藥可能會(huì)合并成復(fù)合樣品，再進(jìn)行LAL檢測(cè)。在這種情況下，應(yīng)通過將單個(gè)樣品計(jì)算的的MVD除以合并樣本的總數(shù)，按比例將MVD調(diào)整為較低值2)。
◆使用在LAL 檢測(cè)經(jīng)過充分驗(yàn)證的試劑和樣品容器
由于鱟試劑和樣品容器的成分也可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生負(fù)面影響4)，因此建議使用經(jīng)充分驗(yàn)證的鱟檢測(cè)和樣品容器。
◆相關(guān)產(chǎn)品
內(nèi)毒素特異性鱟試劑PYROSTAR™ ES-F 系列（凝膠法/動(dòng)態(tài)濁度法）
內(nèi)毒素特異性鱟試劑Limulus Color KY（動(dòng)態(tài)顯色法）
◆參考文獻(xiàn)
1) Wheeler, A. Comparing endotoxin detection methods. Pharmaceutical Technology 2017;41:58–62.
2) FDA. Guidance for industry: pyrogen and endotoxins testing: questions and answers. June 2012.
3) Reich J, Lang P, Grallert H, Motschmann H. Masking of endotoxin in surfactant samples: Effects on Limulus-based detection systems.
Biologicals. 2016;44(5):417-22. doi: 10.1016/j.biologicals.2016.04.012.
4) Bech ?rving R, Carpenter B, Roth S, Reich J, Kallipolitis B, Sonne-Hansen J. Bacterial Endotoxin Testing-Fast Endotoxin Masking Kinetics
in the Presence of Lauryldimethylamine Oxide. Microorganisms. 2020;8(11):1728. doi: 10.3390/microorganisms8111728.