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骨髓基質(zhì)細(xì)胞固紫B鹽染色法
閱讀：657 發(fā)布時(shí)間：2019-11-12
有研究表明，骨髓基質(zhì)細(xì)胞（BMSC）在調(diào)控造血、組織修復(fù)及一些疑難疾病的治療中具有重要意義。然而BMSC并不具備典型形態(tài)特征，且骨髓涂片中數(shù)量甚少，傳統(tǒng)的wright-Giemsa法染色后于普通光鏡下不易識(shí)別。應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞儀、免疫細(xì)胞化學(xué)染色、熒光標(biāo)記技術(shù)等可將其鑒別，但亦各有其局限性。
為此，龔旭波等人[1]建立了將固紫B鹽應(yīng)用于BMSC的特異性細(xì)胞化學(xué)染色方法。該方法簡(jiǎn)便快速，整個(gè)操作過(guò)程僅需30 min，染色明顯，對(duì)陳舊標(biāo)本也易著色，染色液配置后可較長(zhǎng)時(shí)間保存，染色結(jié)果保留數(shù)月也不褪色，表明固紫B鹽對(duì)BMSC染色具有較高的穩(wěn)定性、特異性。
◆實(shí)驗(yàn)步驟
1．標(biāo)本采集
吸取患者骨髓、胸腔積液或腹腔積液50 μL制成涂片。
2．溶液配制
固定液：95％乙醇溶液34.5 mL，40％甲醛溶液5.5 mL，蒸餾水1 mL混合而成；
1 g/L固紫B鹽PBS溶液：50 mg固紫B鹽粉末溶于50 mL PBS溶液，pH 7.2~7.6，4℃下保存；
蘇木精復(fù)染液：蘇木精2 g溶于250 mL無(wú)水乙醇中，硫酸鋁10 g溶于750 mL蒸餾水中，兩種溶液混合后加熱煮沸2 min，再加入0.5 g碘酸鈉和1 g檸檬酸，混勻。
3．固紫B鹽染色
上述新鮮干燥標(biāo)本于固定液固定30 s，小水流沖洗后晾干，置入1 g/L固紫B鹽PBS溶液（pH 7.2~7.6），37℃水浴箱內(nèi)置30 min，流水沖洗1 min，晾干后蘇木精復(fù)染2 min，流水沖洗，待干。鏡下觀察細(xì)胞的著色·情況及陽(yáng)性BMSC形態(tài)特征。
◆染色效果
圖a~d: 骨髓涂片
a~d圖箭頭所示為骨髓基質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)染為紫紅色，胞核不著色，而其他細(xì)胞均無(wú)此染色特征（固紫B鹽染色x1000）
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
060-01081 | Fast Violet B Salt | Wako Special Grade | 1.5 g |
◆相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
052-07221 | Ethanol(99.5) | for Molecular Biology | 100 mL |
166-23555 | PBS(-) | for Cell Culture | 500 mL |
088-07461 | Hematoxylin Monohydrate | for Cell Staining | 5 g |
018-09745 | Aluminium Sulfate | Practical Grade | 500 g |
190-02252 | Sodium Iodate | Wako Special Grade | 25 g |
036-05522 | Citric Acid | Wako Special Grade | 25 g |
◆參考文獻(xiàn)
[1]龔旭波, 吳先國(guó), 盧興國(guó), 等. 骨髓基質(zhì)細(xì)胞固紫B鹽染色法的建立及其臨床意義[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2008,31(8):890-893.