AML-12-LUC (小鼠正常肝細(xì)胞（LUC標(biāo)記）)

細(xì)胞篩選：

該細(xì)胞為已經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LUC的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其LUC熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。

細(xì)胞經(jīng)過20μg/ml嘌呤霉素篩選，平時(shí)培養(yǎng)可維持10μg/ml嘌呤霉素

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇細(xì)胞:  以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考 ，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍 ，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件 下離心3 min ，棄去上清液 ，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶    中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中 ，加入約4 mL培養(yǎng)基 ，培養(yǎng)過夜） 。第三天換液并檢查細(xì)  胞密度。 

2)細(xì)胞傳代:  如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90% ，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清 ，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（ 0.25%Trypsin-0.02%EDTA） 于培養(yǎng)瓶中 ，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞 ，將培養(yǎng)瓶置于   37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定） ，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況 ，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落 ，迅速拿回操作臺(tái) ，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離 心管中 ， 1000 rpm離心5 min ，棄去上清液 ，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中 ，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 

3)細(xì)胞凍存: 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí) ，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液 ，裝入無(wú)菌離心管中 ， 1000 rpm條件下離心4 min ，棄去上清液 ，用PBS清洗 一遍 ，棄盡PBS ，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液 ，使細(xì)胞密度5 × 106 ~ 1 × 107/mL ，輕輕混勻 ，每支凍存管凍存 1mL細(xì)胞懸液 ，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱 ， 24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 三、培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1 . 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好 ，培養(yǎng)液是否有漏液 、渾濁等現(xiàn)象 ，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng) 及時(shí)和我們聯(lián)系。 

2 . 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書 ， 了解細(xì)胞相關(guān)信息 ， 如細(xì)胞形態(tài) 、 所用培養(yǎng)基 、 血清比例、 所需 細(xì)胞因     子等 ，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致 ，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題 ，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。 

3 . 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面 ， 顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。 因運(yùn)輸問題 ， 部分細(xì)胞由于溫度 變化及 劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后 ， 75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 

4. 貼壁細(xì)胞可以消化 ，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞 ， 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min ，棄上 清。加5 mL PBS 重懸細(xì)胞 ，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min ， ，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞 ，并接種 到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中 ，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。 

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片 ，記錄細(xì)胞狀態(tài) ，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。 由 于運(yùn)輸?shù)脑?nbsp;，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況 ，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系 ， 告知細(xì)胞 的具體情況 ， 以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。 

8. 備注 ：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞 ，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后次傳代建議 1： 2 傳代 。 

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) 10cm 皿。

僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動(dòng)物的治療等任何其他用途，不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù)。以實(shí)際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)，網(wǎng)站說明書僅供參考。