HEP3B-RFP(人肝癌細(xì)胞)

細(xì)胞操作詳細(xì)步驟

                           --懸浮細(xì)胞

1.細(xì)胞復(fù)蘇

1.1準(zhǔn)備一個(gè)T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶并做好標(biāo)記，預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基，一支15ml離心管，離心管中加入4-5ml細(xì)胞培養(yǎng)基。

1.2取出細(xì)胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.3將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到加有培養(yǎng)基的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

1.4倒掉上清，加入培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞亦可先將細(xì)胞團(tuán)彈散后加入培養(yǎng)基混勻。

1.5將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充培養(yǎng)基到5ml左右，十字搖晃，將細(xì)胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.細(xì)胞傳代

第一種方法：

2.1細(xì)胞密度達(dá)到2×10⁶細(xì)胞/ml時(shí)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘收集細(xì)胞，棄上清，加入新鮮培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度在1-3×10⁵細(xì)胞/ml.

第二種方法：

2.2細(xì)胞密度達(dá)到2×10⁶細(xì)胞/ml時(shí)，將培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液分裝到新的培養(yǎng)瓶，并補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度在1-3×10⁵細(xì)胞/ml.

3.細(xì)胞凍存

將培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘收集細(xì)胞，棄上清，加入凍存液，重懸細(xì)胞，并分裝到凍存管，凍存密度1-2×10⁶細(xì)胞/ml。將凍存管放入程序降溫盒，并放到-80℃冰箱，過(guò)夜后將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮保存。

4.注意事項(xiàng)

4.1建議收到細(xì)胞后先用我們配套的培養(yǎng)基和血清。收到活細(xì)胞的客戶培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基可回收使用，保存在4度可使用一周。

4.2不同實(shí)驗(yàn)室操作上會(huì)有些許差異，為了避免細(xì)胞不適應(yīng)，請(qǐng)先按照說(shuō)明書推薦的方法和操作步驟培養(yǎng)，待細(xì)胞凍存后可根據(jù)自己的習(xí)慣操作看細(xì)胞是否能夠適應(yīng)。

4.3建議收到細(xì)胞后，前幾代及時(shí)凍存一些細(xì)胞，并最好是可以多凍存幾個(gè)批次。

僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動(dòng)物的治療等任何其他用途，不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù)。