化學(xué)染色法

染色計數(shù)法是細(xì)胞培養(yǎng)中檢查細(xì)胞死活zui常用的方法,直接利用死細(xì)胞和活細(xì)胞對染料的不同親和力,檢查細(xì)胞活性,能在光學(xué)顯微鏡下觀察到染色結(jié)果.可分為兩類:死細(xì)胞著色法和活細(xì)胞著色法.使死細(xì)胞著色的常用染料有臺盼藍(lán),苯胺黑,伊紅Y.能使活細(xì)胞著色的常用染料有結(jié)晶紫,亞甲基藍(lán),甲苯胺藍(lán)等.其中zui常用的是臺盼藍(lán)染色法….細(xì)胞損傷或死亡時,臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA結(jié)合,使其著色,而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞.通過細(xì)胞計數(shù)可得出細(xì)胞的存活率.

優(yōu)點：方便實用，價格低廉，操作簡單

缺點：時間不宜過長,否則部分活細(xì)胞也會著色,會干擾計數(shù).而且,細(xì)胞沒有經(jīng)過固定,形態(tài)不清晰.

熒光染色法

一些熒光染料對死細(xì)胞和活細(xì)胞也有不同的作用效果,利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞活性.如碘化丙錠。(PI),被活細(xì)胞排斥但能穿透正在死亡或已經(jīng)死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜,因此活細(xì)胞不被染料染上色,只有死細(xì)胞或是凋亡細(xì)胞才能染上紅.色.葉啶橙(AO)能透過質(zhì)膜完整的細(xì)胞,嵌入細(xì)胞核DNA,使之發(fā)出明亮的綠色熒光.溴化乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細(xì)胞,嵌入核DNA,發(fā)橘紅色熒光.也可應(yīng)用AO—EB雙染法鑒定細(xì)胞死活.

優(yōu)點：這種檢測方法相比傳統(tǒng)的染料,具有靈敏度高,操作簡便,結(jié)果容易分辨等特點,而且利用雙染法還可以分辨活細(xì)胞,凋亡早期細(xì)胞,凋亡晚期細(xì)胞,死亡細(xì)胞，在細(xì)胞凋亡的檢測上有很廣泛的應(yīng)用。

缺點：要求特殊的儀器進(jìn)行檢測,如熒光顯微鏡,激光掃描共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀.而且通常熒光染料具有毒性,操作作時需要帶手套.