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一、 測量原理                

分光光度法測量的理論依據(jù)是伯郎—比耳定律：當(dāng)容液中的物質(zhì)在光的照射和激發(fā)下，產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)。但物質(zhì)對光的吸收是有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都有其各自的吸收光譜。所以根據(jù)定律當(dāng)一束單色光通過一定濃度范圍的稀有色溶液時，溶液對光的吸收程度A與溶液的濃度c（g/l）或液層厚度b(cm)成正比。其定律表達(dá)式A=abc（a是比例系數(shù)）。當(dāng)c的單位為mol/l時，比例系數(shù)用ε表示，則A=εbc稱為摩爾吸光系數(shù)。其單位為L·mol-1·cm-1它是有色物質(zhì)在一定波長下的特征常數(shù)。T(透光率)=I/I0A(吸光度)= -lgT或A=K·C·L(比色皿的厚度)測定時，入射光I,吸光系數(shù)和溶液的光徑長度不變時，透過光是根據(jù)溶液的濃度而變化的，即“K"為常數(shù)。比色皿厚度一定，“L"、“I0"也一定。只要測出A即可算出“C"。        《分光光度計的表頭上，一行是透光率，一行是吸光度?！?/span>       

二、 722型分光光度計的使用        

1、將靈敏度旋鈕調(diào)“1"檔（信號放大倍率小）。        

2、開啟電源，指示燈亮 ，選擇開關(guān)置于“T"，波長調(diào)到測試用波長。儀器預(yù)熱20分鐘。          

3、打開試樣室（光門自動關(guān)閉），調(diào)節(jié)透光率零點旋鈕，使數(shù)字顯示為000.0。（調(diào)節(jié)100%T旋鈕），蓋上試樣室蓋，將比色皿架處于蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率100%旋鈕使數(shù)字顯示100.0。如顯示不到100.0，則可適當(dāng)增加微電流放大的倍數(shù)。（增加靈敏度的檔數(shù)同時應(yīng)重復(fù)（3）調(diào)節(jié)儀器透光率的“0"位）但盡量使倍率置于低檔使用。這樣儀器會有更高的穩(wěn)定性。         

4、預(yù)熱后，按（3）連續(xù)幾次調(diào)整透光率的“0"位和“100%"的位置，待穩(wěn)定后儀器可進(jìn)行測定工作。      

三、 吸光度“A"的測量        

將選擇開關(guān)置于A 。調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為零，然后將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。       

四、 濃度c的測量        

將選擇開關(guān)由“A"旋“C"將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測樣品放入光路即可讀出被測樣品的濃度值。     

注意事項：       

1、測量完畢，速將暗盒蓋打開，關(guān)閉電源開關(guān)，將靈敏度旋鈕調(diào)低檔，取出比色皿，將裝有硅膠的干燥劑袋放入暗盒內(nèi)，關(guān)上蓋子，將比色皿中的溶液倒入燒杯中，用蒸餾水洗凈后放回比色皿盒內(nèi)。

2、每臺儀器所配套的比色皿不可與其它儀器上的表面皿單個調(diào)換。 

使用方法  

（1）預(yù)熱儀器  將選擇開關(guān)置于“T"，打開電源開關(guān)，使儀器預(yù)熱20分鐘。為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預(yù)熱儀器時和不測定時應(yīng)將試樣室蓋打開，使光路切斷。  

（2）選定波長  根據(jù)實驗要求，轉(zhuǎn)動波長手輪，調(diào)所需要的單色波長。  

（3）固定靈敏度檔  在能使空白溶液很好地調(diào)到“100%"的情況下，盡可能采用靈敏度較低的擋，使用時，先調(diào)到“1"擋，靈敏度不夠時再逐漸升高。但換擋改變靈敏度后，須重新校正“0%"和“100%"。選好的靈敏度，實驗過程中不要再變動。  

（4）調(diào)節(jié)T=0%  輕輕旋動“0%"旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0"，（此時試樣室是打開的）。  

（5）調(diào)節(jié)T=100%  將盛蒸餾水（或空白溶液，或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械母駜?nèi)，并對準(zhǔn)光路，把試樣室蓋子輕輕蓋上，調(diào)節(jié)透過率“100%"旋鈕，使數(shù)字顯示正好為“100.0"。  

（6）吸光度的測定  將選擇開關(guān)置于“A"，蓋上試樣室蓋子，將空白液置于光路中，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示為“.000"。將盛有待測溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內(nèi)，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動試樣架拉手，使待測溶液進(jìn)入光路，此時數(shù)字顯示值即為該待測溶液的吸光度值。讀數(shù)后，打開試樣室蓋，切斷光路。   重復(fù)上述測定操作1-2次，讀取相應(yīng)的吸光度值，取平均值。  

（7）濃度的測定  選擇開關(guān)由“A"旋置“C"，將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測樣品放入光路，此時數(shù)字顯示值即為該待測溶液的濃度值。  

（8）關(guān)機  實驗完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架用軟紙擦凈。