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D2100-50-D2100-50-通用基因組DNA提取試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

更新時(shí)間:2024-09-08 21:00:06

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本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大、完整性好,可直接用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR 、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。
貨號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格價(jià)格
D2100-50通用基因組DNA提取試劑盒50T400.00
D2100-100通用基因組DNA提取試劑盒100T700.00

通用基因組DNA提取試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒為通用型,適合于從土壤,糞便,昆蟲,以及其他樣本中提取基因組DNA。對(duì)細(xì)菌,真菌,昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果,大限度的保留了生物DNA的多態(tài)性。
使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大、完整性好,可直接用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR 、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、樣品的處理:
1)土壤:稱取0.1-0.3g (根據(jù)干濕)土壤,放入研缽中,倒入適量的液氮,立即研磨,重復(fù)3 次,使土壤顆粒研成粉末,加500ul溶液A,振蕩*懸浮。
2)糞便:稱取0.1-0.3g (根據(jù)干濕) 糞便,加500ul溶液A,振蕩*懸浮。
3)昆蟲:稱取0.1-0.3g昆蟲,倒入適量的液氮,立即研磨,重復(fù)3次,使昆蟲研成粉末,加500ul溶液A,振蕩*懸浮。
4)未知樣品,如為細(xì)未狀,可直接稱取0.1-0.3g(根據(jù)干濕)加500ul溶液A,如為塊狀,可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振蕩*懸浮。
2、向懸浮液中加入20ul 10mg/ml的RNase A,55℃放置10min。
3、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混勻,55℃水浴消化,30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,12000轉(zhuǎn)離心10min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。
4、加入500ul溶液B,充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀,于55℃放置5min,沉淀即會(huì)消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如
溶液未變清亮,說(shuō)明樣品消化不*,可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純,還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子,請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間。
5、加入500ul無(wú)水乙醇,充分混勻,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置2min (分兩次加入,每次700ul)。
6、12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中
9、12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。
10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜*懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心2min。
11、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心2min,即可得到高質(zhì)量的基因組DNA.。
注意事項(xiàng):
1、由于樣品不同,終提取的DNA含量和純度也有所不同,一般來(lái)說(shuō),如果所提取DNA用電泳的方法檢測(cè)不到,PCR會(huì)有結(jié)果,樣品盡可能的新鮮。否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降。
2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。
3、如果樣品消化不*,后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況,可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。
4、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul,體積過(guò)小會(huì)影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率;DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。
5、DNA濃度及純度檢測(cè)(濃度較高時(shí)):得到的基因組DNA段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰, OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。
相關(guān)產(chǎn)品:
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T1060 50×TAE 緩沖液
T1050 5×TBE 緩沖液
M1060 D2000 DNA Ladder
M1400 1kb DNA Ladder
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