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BC0940-線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性檢測(cè)試劑盒
  • BC0940-線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性檢測(cè)試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

地: 北京市通州區(qū)馬駒橋鎮(zhèn)聯(lián)東U谷中

更新時(shí)間:2025-02-27 21:00:08

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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C 氧化酶,也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C 的氧化,并終把電子傳遞給氧,生成水。

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性檢測(cè)試劑盒

 

產(chǎn)品英文名:  Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅣActivity Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào):BC0940                產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣           產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價(jià)格:1900
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:       線粒體呼吸鏈復(fù)合體檢測(cè)試劑盒|  線粒體呼吸鏈復(fù)合體|線粒體呼吸鏈|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹:
線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C 氧化酶,也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C 的氧化,并終把電子傳遞給氧,生成水。
    還原型細(xì)胞色素C 在550nm 有特征光吸收,線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C 生成氧化型細(xì)胞色素C,因此550nm 光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。


產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體80mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體21mL×2瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2支,-20℃保存;
試劑三:粉劑×2支,4℃保存;
工作液的配制:臨用前取試劑一、試劑二、試劑三各一支,將試劑二和試劑三依次轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解。
 
產(chǎn)品說(shuō)明
線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C氧化酶,也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C的氧化,并終把電子傳遞給氧生成水。還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收,線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C 生成氧化型細(xì)胞色素C,因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:
一、復(fù)合體Ⅳ的提?。?/span>   

  • 稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1.0 mL提取液,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  • 4 ℃ 600 g離心10min。
  • 將上清液移另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心15min。
  • 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
  • 在沉淀中加入400uL提取液,超聲波破碎(功率20%,超聲5秒,間隔10秒,重復(fù)15次),用于復(fù)合體酶活性測(cè)定,并且用于蛋白含量測(cè)定。

二、測(cè)定步驟:

  1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)550nm,蒸餾水調(diào)零。
  2. 樣本測(cè)定
  3. 將工作液置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育15min;用不完的試劑4℃可保存一周;
  4. 在1mL玻璃比色皿中分別加入
試劑名稱測(cè)定管空白
樣品(μL)40-
蒸餾水(μL)-40
工作液(μL)800800

立即混勻,分別記錄測(cè)定管和空白管550nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2,測(cè)定管的記為A1測(cè)定管,A2測(cè)定管,空白管的記為A1空白管,A2空白管。計(jì)算ΔA1=A1測(cè)定管-A2測(cè)定管,ΔA2=A1空白管-A2空白管,ΔA=ΔA1-ΔA2。
三、復(fù)合體Ⅳ活力單位的計(jì)算:
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1099×ΔA÷Cpr
V 反總:反應(yīng)體系總體積,8.4×10-4 L;ε:細(xì)胞色素C摩爾消光系數(shù),1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.04 mL; T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,需自行測(cè)定,建議使用本公司BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
注意事項(xiàng):

  1. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過(guò)高(高于1),可用蒸餾水稀釋上清液后再測(cè)定。計(jì)算結(jié)果時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。若ΔA大于0.4,需將樣本稀釋適當(dāng)倍數(shù)(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),使A1-A2 小于0.2,可提高檢測(cè)靈敏度;若ΔA偏小,則可以通過(guò)增加加入的樣品體積來(lái)提高靈敏度。
  2. 由于提取液中含有蛋白,所以在測(cè)定樣品蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量(單獨(dú)測(cè)量)。
  3. 本試劑盒試劑足夠完成50管反應(yīng)。
  4. 附:使用樣本重量計(jì)算公式:(檢測(cè)樣本數(shù)為50T/24S)

A、上清中復(fù)合體Ⅳ活力的計(jì)算
按樣本鮮重計(jì)算:
單位定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力(U/g)=[ΔA1×V 反總÷(ε×d)×109(W÷V提取×V樣)÷T=1099×ΔA1÷W
ΔA1:上清測(cè)定值;V 反總:反應(yīng)體系總體積,8.4×10-4 L;ε:細(xì)胞色素C摩爾消光系數(shù),1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.04 mL;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1.0mL。 w:樣本重量,g。T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;
B、沉淀中復(fù)合體Ⅳ活力的計(jì)算
按樣本鮮重計(jì)算:
單位定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力(U/g)=[ΔA2×V 反總÷(ε×d)×109(W÷V提取×V樣)÷T=440×ΔA2÷W
ΔA2:沉淀測(cè)定值;V 反總:反應(yīng)體系總體積,8.4×10-4 L;ε:細(xì)胞色素C摩爾消光系數(shù),1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.04 mL;V提取:加入提取液體積,0.4mL。 w:樣本重量,g。T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;
C、樣本復(fù)合體Ⅳ總活力的計(jì)算
樣本復(fù)合體總活力即為上清中復(fù)合體活力與沉淀中復(fù)合體活力之和。
按樣本鮮重計(jì)算:
復(fù)合體Ⅳ(U/g)=1099×ΔA1÷W+440×ΔA2÷W

相關(guān)文獻(xiàn):
《GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions》 作者:Huazhang Zhu, Weizhen Zhang, Yingying Zhao, Xingsheng Shu, Wencong Wang, Dandan Wang, Yangfan Yang, Zhijun He, Xiaomei Wang & Ying Ying  期刊:Molecular Neurodegeneration 影響因子:8.274 PMID:30466464
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影響因子:5.657 PMID:30639616
《Nitrogen-doped graphene quantum dots (N-GQDs) perturb redox-sensitive system via the selective inhibition of antioxidant enzyme activities in zebrafish.》 作者:Shun Deng,Ailing Fu,Muhammad Junaid,Yan Wang,Qian Yin,Chen Fu,Li Liu,Dong-Sheng Su,Wan-Ping Bian,De-Sheng Pei 期刊:Biomaterials 影響因子:10.273 PMID:30925289

 

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