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BC0710-α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測(cè)試劑盒
  • BC0710-α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測(cè)試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

地: 北京市通州區(qū)馬駒橋鎮(zhèn)聯(lián)東U谷中

更新時(shí)間:2025-02-27 21:00:08

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α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:α-KGDH(EC1.2.4.2)廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。

α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測(cè)試劑盒

 

產(chǎn)品名稱:  α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名:   αKetoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào):BC0710            產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣          產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存;            參考價(jià)格:1300
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:    α酮戊二酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒|α-KGDH檢測(cè)試劑盒|α酮戊二酸脫氫酶|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹:
α-KGDH(EC1.2.4.2)廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。
    α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和NADH,NADH在340nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。


產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容
試劑一:液體60mL×1瓶,4保存;
試劑二:液體0.6mL×1支,-20保存;
試劑三:液體55mL×1瓶,4保存;
試劑四:粉劑×1支,4保存;
試劑五:粉劑×1支,4保存;
試劑六:粉劑×1支,-20保存;
試劑七:粉劑×1支,-20保存;
試劑八:粉劑×1支,-20避光保存。臨用前加入2mL雙蒸水充分混勻待用,用不完的試劑仍-20保存。
工作液的配制:臨用前把試劑四、試劑五、試劑六、試劑七轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解待用。

產(chǎn)品說(shuō)明
   α-KGDHEC 1.2.4.2)廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和 NADHNADH340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

試驗(yàn)所需自備儀器和樣品
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、α-KGDH的提取
稱取約0.1g組織或收集約500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL試劑二,冰浴用勻漿器或研缽充分研磨,4  11000 g離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定步驟
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零
2. 空白管:
1mL工作液加入1mL石英比色皿,37孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL試劑八和60μL蒸餾水,混勻并立即測(cè)量340nm0s的吸光值A1,37準(zhǔn)確反應(yīng)2min,記錄340nm2min時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA空白=A2-A1
3.測(cè)定管:
1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37(哺乳動(dòng)物)或25(其它物種)孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL試劑八和60μL樣本,混勻并立即測(cè)量340nm0s的吸光值A3,37(哺乳動(dòng)物)或25(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)2min,記錄340nm2min時(shí)的吸光值A4,計(jì)算ΔA測(cè)定=A4-A3。
三、α-KGDH活性計(jì)算
1.按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。
 α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA測(cè)定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(Cpr×V) ÷T
=1473.7×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷Cpr
2.按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。
 α-KGDHU/g 鮮重)=[(ΔA測(cè)定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(V÷V樣總×W)÷T
=1488.5×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷W
3. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。
α-KGDH活性(U/104cell)=[(ΔA測(cè)定-ΔA空白ε×d×V反總×109]÷(V÷V樣總×500)  ÷T
=2.977×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)
V反總:反應(yīng)體系總體積,1.1×10-3 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.06mLV樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01mLT:反應(yīng)時(shí)間,2minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣品質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
注意事項(xiàng)
1、測(cè)定過(guò)程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持3725,取小燒杯一只裝入一定量的3725蒸餾水,將此燒杯放入3725水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4、測(cè)定管的ΔA值在0.01-0.25之間,若測(cè)定管的ΔA值大于0.25,需將樣本進(jìn)行稀釋。

相關(guān)文獻(xiàn):
《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448

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