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細(xì)胞培養(yǎng)試劑人或各種動物組織單個核細(xì)胞分離液
  • 細(xì)胞培養(yǎng)試劑人或各種動物組織單個核細(xì)胞分離液
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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更新時間:2024-08-25 08:13:35瀏覽次數(shù):1641評價

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細(xì)胞培養(yǎng)試劑人或各種動物組織單個核細(xì)胞分離液
本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是 Ficoll 400 與泛影酸葡甲胺。適用于從各種動物組織樣本中分離單個核細(xì)胞, 在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。

細(xì)胞培養(yǎng)試劑人或各種動物組織單個核細(xì)胞分離液
規(guī)格:100ml/kit
保存:室溫避光儲存,有效期少 2 年。


產(chǎn)品簡介:
    本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是 Ficoll 400 與泛影酸葡甲胺。適用于從各種動物組織樣本中分離單個核細(xì)胞, 在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。 其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液。

    注:因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細(xì)胞的名稱。


一、  分離方法說明及圖例
    A.取組織勻漿單細(xì)胞懸液(細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml,具體制備方法參照“組織單細(xì)胞懸液的制備”)2ml,小心加于2ml本分離液之液面上;
    B. 以400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)。
       此時離心管中由上下細(xì)胞分為四層。 *層; 為胎牛血清液層。 第二層; 為環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層。 。 。 。
       第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含4-5ml細(xì)胞洗滌液的試管中,充分混勻后,以500g(約1800轉(zhuǎn)/分)離心20分鐘,棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌2次即得所需單個核細(xì)胞。
注: 提取率約為80%。
二、組織單細(xì)胞懸液的制備
    注:A.本說明只提供機械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法,酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同,請各實驗室自行選擇進行試驗。
    B. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。
    剪碎法:將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪勻漿狀,加入5ml組織勻漿液及20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用100目不銹鋼濾網(wǎng)過濾到試管內(nèi);離心沉淀1500轉(zhuǎn)/分×3 min,再用細(xì)胞洗滌液清洗3次,每次以500rpm短時低速離心除去細(xì)胞碎片,以200目不銹鋼濾網(wǎng)過濾去細(xì)胞團塊。作細(xì)胞計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(2~5)×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×108-1×10 9 個/ml的單細(xì)胞懸液備用。
    勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入70ml組織研磨器內(nèi),加入2ml組織勻漿液及20%胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動研棒,研磨勻漿;用5ml組織勻漿液及20%胎牛血清沖洗研器;收集細(xì)胞懸液,經(jīng)200目不銹鋼濾網(wǎng)過濾;離心沉淀800rpm×2min ,再用細(xì)胞洗滌液洗3次,離心沉淀。作細(xì)胞計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(2~5)×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細(xì)胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細(xì)胞懸液備用。


細(xì)胞計數(shù)方法:
    細(xì)胞計數(shù)法是用來計數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)進行。既可用于分離(散)細(xì)胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,也可用于對培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進行計數(shù)。
     不論計數(shù)的對象如何,均須制備分散的細(xì)胞懸液。
     計數(shù)與計算過程
     1)、在細(xì)胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。
     2)、用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,蓋玻片被液體充滿為止。
     3)、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對于壓線的細(xì)胞只計數(shù)在上線和左線者,對于細(xì)胞團按單個細(xì)胞計數(shù)。
     4)、按下式計數(shù)細(xì)胞懸液的密度: 細(xì)胞密度=(4個大格細(xì)胞總數(shù)/4)×10 4 個/ml×稀釋倍數(shù)公式中乘以10 4 因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:
      1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3


細(xì)胞計數(shù)要點:
     A. 進行細(xì)胞計數(shù)時,要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于10 4 個/ml,如果細(xì)胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計數(shù)時,遇到2個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團,應(yīng)按單個細(xì)胞計算。如果細(xì)胞團>10%,說明細(xì)胞分散不充分; 或細(xì)胞數(shù)<200個/10mm 2 或>500個/10 mm 2 時,說明稀釋不當(dāng),需重新制備細(xì)胞懸液。
     B. 要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好,否則影響計數(shù)準(zhǔn)確性。
     C. 取樣計數(shù)前,應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液,尤其是多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻,以求計數(shù)準(zhǔn)確;
     D. 數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞,若細(xì)胞聚集成團時,只按照一個細(xì)胞計算。如果細(xì)胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。
     E. 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。

 

三、  注意事項
     A. 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
     B. 待分離的樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
     C. 由于各品牌離心機的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時間,摸索的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
     D. 好使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
     E. 優(yōu)抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積 。
四、產(chǎn)品性能指標(biāo)

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下


五、貯藏及保存期限
    18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周。
    注:若保證無微生物污染,啟封后可置4℃長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

 

細(xì)胞培養(yǎng)試劑人或各種動物組織單個核細(xì)胞分離液訂購說明:

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


運輸說明:

1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。

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