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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>>>>> E010050 Uracil-DNA Glycosylase 尿嘧啶糖基化酶

E010050 Uracil-DNA Glycosylase 尿嘧啶糖基化酶
  • E010050  Uracil-DNA Glycosylase  尿嘧啶糖基化酶
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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更新時間:2024-08-23 11:38:00瀏覽次數(shù):2163評價

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E010050 Uracil-DNA Glycosylase 尿嘧啶糖基化酶
其作用原理基于:如果在PCR反應(yīng)中以dUTP替代dTTP摻入DNA中,形成了含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵,降解該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物。

產(chǎn)品介紹:
尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG)來源于大腸桿菌重組克隆表達(dá),分子量為25kDa,可催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶。UNG酶對RNA無活性,主要應(yīng)用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。其作用原理基于:如果在PCR反應(yīng)中以dUTP替代dTTP摻入DNA中,形成了含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵,降解該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物。

規(guī)格:1U/μl

儲存緩沖液:
20mM Tris-HCl(pH8.0,25℃),150mM NaCl,1mM EDTA,1mM DTT,0.05% Tween20,50%glycerol.

試劑組成:

10×Reaction Buffer:200mM Tris-HCl(pH8.0,25℃),100mM NaCl,10mM EDTA,1mg/ml BSA.

活性定義:
37℃條件下,1小時降解1μgdU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位。

保存條件:
每天或每周使用保存于-20℃。長期儲存應(yīng)保存于-70℃保存,并嚴(yán)格避免-70℃保存時反復(fù)凍融。

質(zhì)量控制:

1、SDS-PAGE電泳純度大于98%;

2、1U UNG在 37℃處理3分鐘后,103拷貝以下含U模版應(yīng)*降解,不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。

3、無核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶活性、RNase酶活性;

1SDS-PAGE 銀染純度大于98%


2UNG 酶消化能力試驗


    以700bp含dUTP的不同拷貝數(shù)基因片段為模板,分別加入含0.5U UNG酶的50μl PCR反應(yīng)體系,50 消化2min,94℃ 滅活4min后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

A. Biori UNG

B. Promega UNG

Lane 1:Negative control no template;

Lane 2:positive control(no UNG;

Lane 3~lane 10103 to 1010 copies of template 

結(jié)果表明,我們的UNG酶與Promega UNG酶消化效果相當(dāng),均可以有效控制108拷貝以下含有U-DNA的模板的污染。

(3)UNG酶穩(wěn)定性實驗

UNG酶置于37℃進(jìn)行7天加速試驗。以含dUTP的(106107、108、109 copies/ml)基因為模板,采用含dUTP的體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增,50μl反應(yīng)體系加入0.5U UNG酶,于50℃消化2min,94℃滅活4min;然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。以Promega公司UNG酶為對照,考察UNG酶對模板的消化效果。





1negativeNo template); 

29postive 104、105、106、107、108、109、1010、1011 copies /ml, No UNG);

1014control Promega UNG106、107、108、109、1010 copies /ml);

1519Sample UNG106、107、108、109、1010 copies/ml。



14Sample UNG106、107、108、109 copies/ml);

58Control Promega UNG106、107、108、109 copies/ml); 

9negative No template);

1013Postive 106、107、108、10copies/mlNo UNG)。




結(jié)果表明,我們的UNG酶與Promega UNG酶穩(wěn)定性相當(dāng),均可以在37℃加速7天,仍保持對107copies/mldUTP模板的消除能力。

反應(yīng)條件:

Component

Volumeper

Reactionμl

Concentration in Master Mix

Template

*

< 1μg/reaction

Primer1

1~5

0.2~1.0μM

Primer 2

1~5

0.2~1.0μM

d NTPs

replace dTTP for 150μM~600μM dUTP) 

1

150μM

dATP、dGTPdCTP

10×PCR Buffer

5

25mM MgCl2

2~8

1.0~4.0mM

 Taq5U/μl

0.25

1.25U

UNG(1U/μl

0.25

0.1~0.5

0.25U

0.1~0.5U

H2O

*

——

Total volume

50μl


1、Incubate the product for 2 min at 50℃;

2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.

注意事項:
1、避免多次凍融,切勿暴露在溫度波動較大之處。溫度波動對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。

2、尿嘧啶DNA糖基酶可以在PCR反應(yīng)前清除不慎污染的U-DNA分子。為有效防止污染,一個實驗室必須在所有的PCR反應(yīng)中均使用dUTP作為dNTPs組分之一進(jìn)行擴(kuò)增,使所有擴(kuò)增產(chǎn)物都成為U-DNA

3、由于不同基因堿基組成不同,因此有些基因?qū)?/span>UNG酶殘留活性十分敏感,如發(fā)現(xiàn)使用UNG 酶影響擴(kuò)增靈敏度,可以嘗試降低UNG酶的用量或?qū)Ψ磻?yīng)體系中dTTPdUTP的比例進(jìn)行調(diào)整。推薦使用我公司生產(chǎn)的TS-UNG,該酶滅活更加*,可以大大簡化上述試驗過程。

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