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小鼠腫瘤浸潤(rùn)組織淋巴細(xì)胞分離液

【檢驗(yàn)原理】

外周血中單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等細(xì)胞，其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和白細(xì)胞等細(xì)胞密度較大，為 1.090 g/ml 左右，而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為 1.075～1.090 g/ml，血小板為 1.030～1.035 g/ml。為此，本公司將葡聚糖(右旋糖酐)和泛影酸葡甲胺按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過(guò)澄清及除菌過(guò)濾后制成一種密度在 1.077g/ml 并且近于等

滲的溶液（分層液），經(jīng)過(guò)密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。

【檢驗(yàn)方法】

取新鮮抗凝血 1ml，與注射用生理鹽水 1:1 混勻后，小心加于 2ml 的細(xì)胞分離液之液面上，以 400g 離心(半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子)20 分鐘，此時(shí)離心管中由上下細(xì)胞分四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含注射用生理鹽水 4-5毫升的試管中，充分混勻后， 400g，離心 20 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗 2 次即得所需細(xì)胞。(此方法效果較好，推薦使用)

【主要組成成份】

本品為帶有乳光或微乳光的注射水溶液，主要組成成份是葡聚糖（右旋糖酐）與泛影酸葡甲胺。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃避光保存，有效期 2 年。啟封后置 4℃保存，有效期 1 周。本品為真空包裝，未啟封前置于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【適用儀器】

 半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)。

【樣本要求】

本分離液要求血液為新鮮的抗凝血，血液收集時(shí)應(yīng)無(wú)菌操作且在儲(chǔ)存、處理和運(yùn)輸過(guò)程中避免冷凍和冷藏。

【參考值（參考范圍）】

收集淋巴細(xì)胞的純度大于 80%。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶(hù)可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心的時(shí)間，摸索佳的分離條件（具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定）。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

 本試驗(yàn)要求，在正常大氣壓下，樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 20℃± 2℃。本分離液在低溫時(shí)呈較高密度，在高溫時(shí)呈較低密度。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

密度 1.077 ± 0.001g/ml

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

400g，離心20 分鐘

內(nèi)毒素 ＜0.06EU/ml

無(wú)菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 20 粒以下，含 25μm 以上的不溶性微粒 5 粒以下

【注意事項(xiàng)】

1. 啟封后應(yīng)置 4℃保存，避免微生物的污染。

2. 細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液溫度升室溫時(shí)，搖勻后使用。

3. 整個(gè)分離過(guò)程中，溫度應(yīng)控制在 20℃± 2℃且在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，避免微生物的污染，否則會(huì)影響分離質(zhì)量。