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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>基因工程>>感受態(tài)細(xì)胞>> C1200-10*0感受態(tài)細(xì)胞

*0感受態(tài)細(xì)胞
  • *0感受態(tài)細(xì)胞
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌
  • 型號(hào) C1200-10
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時(shí)間:2024-08-20 11:31:22瀏覽次數(shù):1415評(píng)價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 10×100μl
貨號(hào) C1200 主要用途 可用于藍(lán)白斑篩選
*0感受態(tài)細(xì)胞保存: 所有受體菌均為甘油保存,-70℃可長(zhǎng)期保存,-20℃可保存一年。感受態(tài)為-70℃保存,運(yùn)輸均為干冰。

本公司生產(chǎn)的*0感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108,-70℃保存六個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

基因型:F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

*0感受態(tài)細(xì)胞 點(diǎn):一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重級(jí)缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α-互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。

操作方法:(以下各步驟均為無(wú)菌操作)

1,將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化,以下實(shí)驗(yàn)以100ul感受態(tài)細(xì)胞為例。

2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA,注意目的DNA的體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一,輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘,注意不要搖動(dòng)離心管。

4、向離心管中加入500ul無(wú)菌無(wú)抗的SOC或LB培養(yǎng)基,37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。

5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整,如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取100ul左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過(guò)多菌液可以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項(xiàng):

1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃,不可反復(fù)凍融,否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作,防止其它DNA或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3、轉(zhuǎn)化時(shí),轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算:轉(zhuǎn)化率=產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接產(chǎn)物,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。

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