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【生物小知識】胰蛋白酶消化細(xì)胞

閱讀：5338 發(fā)布時間：2015-8-19

【生物小知識】胰蛋白酶消化細(xì)胞

2015-08-17索萊寶生物

細(xì)胞外含有多種胞外蛋白，如膠原蛋白，這些蛋白使細(xì)胞間或細(xì)胞與培養(yǎng)瓶內(nèi)壁粘連起來。用胰蛋白酶分解這些蛋白質(zhì)后就可以使它們分開，這個過程叫做胰蛋白酶的消化作用。

貼壁細(xì)胞就是貼著細(xì)胞瓶底生長的細(xì)胞，細(xì)胞長滿瓶底后需要傳代，這個時候直接吹打細(xì)胞對細(xì)胞傷害很大，需要用胰蛋白酶對其消化，使細(xì)胞與瓶底貼合的沒那么牢固，這個時候就可以進行吹打使其從瓶底脫落下來。

胰蛋白酶有消化作用，處理動物組織后，可以使動物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個細(xì)胞。一般消化細(xì)胞用0.25%的胰酶，而且時間一定要掌握好，一邊消化，一邊在顯微鏡下觀察，注意不能消化過了反而對細(xì)胞自身造成損傷。除了胰蛋白酶外膠原蛋白酶也可以使用，因為這兩種蛋白酶的pH活性比較適中。

我公司的胰蛋白酶消化液種類全面，可以滿足大部分客戶需求。主推產(chǎn)品（T1300/T1320）胰蛋白酶-EDTA 消化液(含酚紅和不含酚紅)。

產(chǎn)品說明：

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶，EDTA 等，其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞外基質(zhì)）水解，使組織或貼壁細(xì)胞分散成單個細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液用于進一步的實驗。

索萊寶生產(chǎn)的胰蛋白酶-EDTA 消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和 0.02%EDTA（0.53mM），溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中，經(jīng)過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化。本產(chǎn)品具有方便快速、穩(wěn)定安全、細(xì)胞狀態(tài)好等特點。通常室溫消化2分鐘左右就可以消化大多數(shù)貼壁細(xì)胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚紅和不含酚紅2類產(chǎn)品，酚紅具有pH指示作用。

保存：-20℃保存，有效期 12 個月。

使用方法：

1. 貼壁細(xì)胞的消化：

a) 吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA 消化液，蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 1-2 分鐘。不同的細(xì)胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長消化時間。

c) 顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實驗。

d) 如果發(fā)現(xiàn)消化不足，可加入胰蛋白酶-EDTA 消化液重新消化。

e) 如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g 離心 1 分鐘，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實驗。

2. 組織的消化：

不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。