樣本采集:采集適量人靜脈血,室溫靜置待血液自然凝固后,離心分離獲取血清樣本。采血過程需嚴格遵循無菌操作規(guī)范,防止樣本受到污染。采集后的血清樣本若不能立即檢測,應妥善保存于 - 20℃冰箱,避免反復凍融,以免影響抗體活性。
試劑盒準備:從冰箱取出試劑盒,在室溫(20℃ - 25℃)下平衡 30 分鐘,確保試劑盒內(nèi)各試劑溫度均勻。同時準備好移液器、吸頭、酶標儀等實驗器材,并檢查其性能是否正常,保證檢測過程順利進行。
加樣:將標準品(如有)、待測血清樣本以及空白對照按規(guī)定體積準確加入微孔板相應孔中,輕輕振蕩混勻,使樣本與包被抗原充分接觸,隨后在設定溫度下孵育一定時間,促進抗原抗體反應。
洗板:孵育結束后,棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,徹di清除未結合的物質(zhì),降低非特異性信號干擾。每次洗滌后需將微孔板拍干,避免殘留液體影響后續(xù)反應結果。
加酶標抗體:向各孔加入適量酶標抗人 IgM 抗體,振蕩混勻后再次孵育,讓酶標抗體與已結合的軍團菌 IgM 抗體充分結合。
顯色與終止:加入底物顯色液,在避光條件下孵育,待顏色變化至合適程度時,加入終止液終止反應,使反應停止在最佳檢測狀態(tài),便于準確讀取結果。
結果判定:立即使用酶標儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值。若樣本 OD 值大于試劑盒給定的臨界值,則判定為陽性,表明樣本中存在軍團菌 IgM 抗體;若樣本 OD 值小于等于臨界值,則判定為陰性,即樣本中未檢測到軍團菌 IgM 抗體。對于具有定量功能的試劑盒,可根據(jù)標準曲線計算出樣本中軍團菌 IgM 抗體的具體含量。
高靈敏度:能夠檢測到極微量的軍團菌 IgM 抗體,有助于在感染早期,抗體水平較低時,及時發(fā)現(xiàn)感染情況,為早期診斷提供有力支持。
特異性強:試劑盒中的抗原和酶標抗體具有高度特異性,與其他病原體抗體交叉反應極小,能準確識別軍團菌 IgM 抗體,保證檢測結果的準確性,減少誤診和漏診情況的發(fā)生。
操作簡便:整個檢測流程相對標準化,操作步驟清晰明了,經(jīng)過簡單培訓的人員即可熟練操作,適用于各級醫(yī)療機構和實驗室開展檢測工作。
結果穩(wěn)定:在規(guī)定的保存條件下,試劑盒內(nèi)各試劑性能穩(wěn)定,多次檢測同一批樣本,結果重復性良好,為臨床診斷和病情監(jiān)測提供可靠的數(shù)據(jù)支持。