樣本采集:依據(jù)檢測(cè)需求,采集適量人靜脈血。將血液室溫靜置,待其自然凝固后,通過離心分離獲取血清樣本;若需血漿樣本,則在采血時(shí)加入合適抗凝劑,再經(jīng)離心處理得到。采集過程需嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,防止樣本污染。采集后的樣本若不能及時(shí)檢測(cè),應(yīng)妥善保存于 - 20℃冰箱,避免反復(fù)凍融影響抗體活性。
試劑盒準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,在室溫(20℃ - 25℃)下平衡 30 分鐘,使試劑盒內(nèi)各試劑溫度均勻。同時(shí)準(zhǔn)備好移液器、吸頭、酶標(biāo)儀等實(shí)驗(yàn)器材,并檢查其性能是否正常,確保檢測(cè)工作順利開展。
加樣:將標(biāo)準(zhǔn)品(若有)、待測(cè)樣本及空白對(duì)照按規(guī)定體積準(zhǔn)確加入微孔板相應(yīng)孔中,輕輕振蕩混勻,促使樣本與包被抗原充分接觸,然后在設(shè)定溫度下孵育一定時(shí)間,以保證抗原抗體反應(yīng)充分進(jìn)行。
洗板:孵育結(jié)束后,棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,徹di清除未結(jié)合的物質(zhì),有效降低非特異性信號(hào)干擾。每次洗滌后需將微孔板拍干,防止殘留液體影響后續(xù)反應(yīng)結(jié)果。
加酶標(biāo)抗體:向各孔加入適量酶標(biāo)抗人 IgM 抗體,振蕩混勻后再次孵育,使酶標(biāo)抗體與已結(jié)合的軍團(tuán)菌 IgM 抗體充分結(jié)合。
顯色與終止:加入底物顯色液,在避光條件下孵育,待顏色變化至合適程度時(shí),加入終止液終止反應(yīng),使反應(yīng)停止在最佳檢測(cè)狀態(tài),便于準(zhǔn)確讀取結(jié)果。
結(jié)果判定:立即使用酶標(biāo)儀在規(guī)定波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值。若樣本 OD 值大于試劑盒給定的臨界值,則判定為陽性,表明樣本中存在軍團(tuán)菌 IgM 抗體;若樣本 OD 值小于等于臨界值,則判定為陰性,即樣本中未檢測(cè)到軍團(tuán)菌 IgM 抗體。對(duì)于具有定量功能的試劑盒,可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中軍團(tuán)菌 IgM 抗體的具體含量。
高靈敏度:能夠檢測(cè)到極低濃度的軍團(tuán)菌 IgM 抗體,有助于在感染早期,抗體水平較低時(shí)及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染,為早期診斷提供有力支持。
特異性強(qiáng):試劑盒中的抗原和酶標(biāo)抗體對(duì)軍團(tuán)菌 IgM 抗體具有高度特異性,與其他病原體抗體交叉反應(yīng)極小,保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,有效減少誤診和漏診情況。
操作簡(jiǎn)便:整個(gè)檢測(cè)流程相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化,操作步驟清晰明了,經(jīng)過簡(jiǎn)單培訓(xùn)的人員即可熟練操作,適用于各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)和實(shí)驗(yàn)室。
結(jié)果穩(wěn)定:在規(guī)定的保存條件下,試劑盒內(nèi)各試劑性能穩(wěn)定,多次檢測(cè)同一批樣本,結(jié)果重復(fù)性良好,為臨床診斷和病情監(jiān)測(cè)提供可靠的數(shù)據(jù)支持。
臨床診斷:用于軍團(tuán)菌肺炎等軍團(tuán)菌感染疾病的早期診斷,幫助醫(yī)生快速判斷病因,制定合理的治療方案,提高患者治yu率。
疫情監(jiān)測(cè):在軍團(tuán)菌疫情可能爆發(fā)的區(qū)域,對(duì)人群進(jìn)行大規(guī)模篩查,及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在感染源,有效控制疫情傳播,為公共衛(wèi)生防控提供重要依據(jù)。
流行病學(xué)調(diào)查:通過檢測(cè)人群中軍團(tuán)菌 IgM 抗體的陽性率,了解軍團(tuán)菌在特定地區(qū)的感染流行情況,為制定針對(duì)性的防控措施提供數(shù)據(jù)支撐。