產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品屬性：

CAS：3513-03-9

分子式：C17H27CIN8O5

分子量：458.9

純度：＞95%(HPLC)

儲(chǔ)存條件：-20℃

別名：滅稻瘟素

產(chǎn)品應(yīng)用：

抗性基因：目前已經(jīng)克隆和測(cè)序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種，一種是分離自產(chǎn)生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基轉(zhuǎn)移酶基因bls，另外兩種是脫氨酶基因，包括從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。Bsr和 BSD基因是常用的篩選標(biāo)志，用于哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，也可用于E.Coli。

應(yīng)用濃度：

1)Escherichia coli

E. coli對(duì)Blasticidin S的敏感性稍差，但是轉(zhuǎn)化子對(duì)Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養(yǎng)基(pH 8)進(jìn)行篩選，濃度范圍為50-100 μg/ml Blasticidin S。高的pH值可以提高Blasticidin S的活性。

2)哺乳動(dòng)物細(xì)胞

哺乳動(dòng)物細(xì)胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/ml。初次實(shí)驗(yàn)建議通過滅殺曲線來確定佳使用濃度。

- 25-100 µg/ml in bacteria

- 1-30 µg/ml in mammalian cells

操作步驟(哺乳動(dòng)物穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選)

Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/ml。攜帶bsr或BSD基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，在含有Blasticidin S的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基中孵育，用于篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

(1)轉(zhuǎn)染后48h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代(注：細(xì)胞處于活躍分裂期時(shí)抗生素工作好。細(xì)胞密度太高，抗生素效率降低。細(xì)胞分盤時(shí)覆蓋率不超過25%);

(2)每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含抗生素的新鮮培養(yǎng)基;

(3)7天后檢測(cè)細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要增加一周或更久。

(4)轉(zhuǎn)移5-10個(gè)耐受克隆到35mm細(xì)胞盤中，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融，有效期一年。