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翌圣生物科技（上海）股份有限

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供應(yīng)簡介

報(bào)告基因檢測是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究領(lǐng)域中分析結(jié)構(gòu)基因旁側(cè)區(qū)域潛在的順式元件（如啟動子、增強(qiáng)子和沉默子等）和反式作用因子相互作用關(guān)系的一種重要工具。吉滿生物生產(chǎn)的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（DualLuciferase Reporter Gene Aassy Kit），是一種結(jié)合螢火蟲和海腎熒光素酶檢測的先進(jìn)輔助報(bào)告基因技術(shù)。

詳細(xì)介紹

雖然螢火蟲和海腎熒光素酶都具有生物發(fā)光報(bào)告基因的檢測特點(diǎn)，但它們卻具有*不同的進(jìn)化起源，因而它們的酶結(jié)構(gòu)和底物要求*不同。我們利用這一特點(diǎn)，將它們配合起來使用，即可形成十分有效的雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)，其中Renilla Luciferase通常作為內(nèi)對照。它的實(shí)驗(yàn)原理是先通過螢火蟲熒光素（luciferin）為底物來檢測螢火蟲熒光素酶。熒光素酶在Mg²⁺和O₂參與下催化熒光素氧化成oxyluciferin,在熒光素的氧化過程中，發(fā)出生物熒光（bioluminomescence）。然后在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中加入抑制螢火蟲熒光素酶催化熒光素發(fā)光的物質(zhì)，來終止螢火蟲熒光素的生物熒光，同時(shí)加入海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）的底物coelenterazine。通過熒光素酶的催化氧化成coelenteramide發(fā)出生物熒光。然后通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測定儀測定生物熒光。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 簡便，快捷。

● 靈敏度高，可檢測10^-20mol的螢火蟲熒光素酶和3×10^-19mol的海腎熒光素酶。

● 安全，非放射性。

● 酶的濃度線性范圍可達(dá)7個(gè)數(shù)量級。

● 準(zhǔn)確性高：使用海腎熒光素酶作為對照可以大大降低細(xì)胞數(shù)量，生長狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率等對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

注：Luciferase Assay Reagent避光保存，不能反復(fù)凍融。

保存條件：

未拆封試劑盒-20℃避光保存，有效期為6個(gè)月；-70℃避光保存，有效期為一年。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 細(xì)胞裂解：

（1）. 將轉(zhuǎn)入報(bào)告基因的細(xì)胞中的培養(yǎng)基移除，加PBS輕輕洗滌。按如下方案加入Cell Lysis Buffer，將培養(yǎng)板放在微型振蕩器上室溫振蕩15min，充分裂解細(xì)胞。

96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板
30μl	60μl	120μl	250μl	500μl

注：裂解產(chǎn)物可室溫保存6小時(shí)，4℃保存16小時(shí)，-70℃可長期存放。（裂解產(chǎn)物不能多次反復(fù)凍融）

（2）. 將充分裂解后的裂解產(chǎn)物，10,000-15,000rpm離心3-5min。去離心后的上清液移入新的EP管進(jìn)行后續(xù)檢測。

2. Renilla Luciferase Assay 工作液的配置：

按照樣品要求的量，將Renilla Luciferase Assay Reagent（100×）按照稀釋比例加入Renilla Luciferase Assay buffer，混勻后室溫放置。

3. 熒光素酶檢測：

（1）. 按照儀器說明書要求將熒光檢測打開，設(shè)定參數(shù)測定時(shí)間為10s，測定間隔為2s。

（2）. 將樣品按照20～100μl的體積加入測量管中（保持樣品的加樣量*），另外加入100μl Luciferase Assay Reagent混勻2-3次（不能漩渦混勻），充分混勻后測定RLU（Relative light unit），同時(shí)設(shè)置Cell Lysis buffer為空白對照孔。

（3）. 將檢測后的樣品，加入100μl配制的Renilla Luciferase Assay工作液混勻2-3次，充分混勻后測定RLU，同時(shí)設(shè)置Renilla Luciferase Assay工作液為空白對照孔。

（4）. 將（2）檢測的RLU值與（3）檢測出的RLU值進(jìn)行比較，通過得出的比值來確定報(bào)告基因的激活程度。

注意事項(xiàng)：

1. 溫度會對酶的活性會產(chǎn)生影響，因此所有試劑應(yīng)放置室溫后再使用，但海腎熒光素酶底物應(yīng)置于冰浴。

2. Renilla Luciferase Assay 工作液需現(xiàn)配先用，不能反復(fù)凍融。

3. 螢火蟲熒光素酶催化的生物發(fā)光的zui強(qiáng)發(fā)光波長為560nm，海腎熒光素酶催化的生物發(fā)光的zui強(qiáng)發(fā)光波長為465nm。

產(chǎn)品價(jià)格：

貨號	名稱	產(chǎn)地	規(guī)格	報(bào)價(jià)/元	*/元
GM-040502A	Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒	Genomeditech	100次	689.00	551.20
GM-040502B	Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒	Genomeditech	500次	2,259.00	1,807.20
GM-040502C	Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒	Genomeditech	1000次	4,296.00	3,436.80

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