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500 U-Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶
500 U-Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

地:上海

貨物所在地:上海上海市

更新時(shí)間:2025/4/2 21:00:06

訪問次數(shù):615

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供應(yīng)簡(jiǎn)介
真核生物中mRNA經(jīng)轉(zhuǎn)錄后修飾在5端形成一個(gè)特殊結(jié)構(gòu),即帽子結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)對(duì)mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)與翻譯過程均有較重要作用。Yeasen公司可以批量生產(chǎn),工業(yè)級(jí)供應(yīng)。


詳細(xì)介紹

 產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

儲(chǔ)存

價(jià)格(元)

Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

10615ES76

500 U

-20

1256.00

Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

10615ES84

2000 U

-20

3856.00

Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

10615ES92

10000 U

-20

14856.00

產(chǎn)品描述

真核生物中mRNA經(jīng)轉(zhuǎn)錄后修飾在5端形成一個(gè)特殊結(jié)構(gòu),即帽子結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)對(duì)mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結(jié)構(gòu)的有效酶,其由D1和D12兩個(gè)亞基組成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷?;D(zhuǎn)移酶活性和鳥嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶活性,可將7-甲基鳥嘌呤帽結(jié)構(gòu)(m7Gppp)連接到RNA的5末端m7Gppp5N。牛痘病毒加帽酶,在合適濃度的加帽緩沖液(Capping buffer鳥苷三磷酸(GTP,S-腺苷甲硫氨酸(SAM等存在條件下,能夠在一個(gè)小時(shí)之內(nèi)對(duì)RNA進(jìn)行加帽,效率可達(dá)到*,并且保證正確的方向。

本品以無(wú)菌液體形式提供,可應(yīng)用于體內(nèi)/外翻譯前mRNA的加帽反應(yīng)或mRNA的5末端標(biāo)記反應(yīng)

產(chǎn)品性質(zhì)

來源(Source)

攜帶牛痘病毒加帽酶基因的E. coli

zui適溫度(Optimum Temperature)

37℃

儲(chǔ)存緩沖液(Storage Buffer)

20 mM Tris-HCl pH 8.0,100 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA0.1% Triton X-100,50%甘油

活性單位定義(Unit Definition)

37℃條件下,1小時(shí)內(nèi)將10 pmol GTP(α- 32 P)摻入到一條含80個(gè)核苷酸(80 nt)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上所需要的酶量。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸,-20℃保存,有效期1年。

注意事項(xiàng)

1)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

2)所提取的RNA需經(jīng)過純化并使用無(wú)核酸酶的水重懸;

3)在加入酶之前需要對(duì)RNA溶液進(jìn)行加熱以去除5末端的二級(jí)結(jié)構(gòu)

4)對(duì)于已知5末端結(jié)構(gòu)的RNA,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至60分鐘,提高加帽效率;

55末端標(biāo)記反應(yīng)體系中,GTP儲(chǔ)液應(yīng)稀釋為反應(yīng)體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍。

使用方法

1. 加帽反應(yīng)

本步驟適用于10 μg RNA(≥ 100 nt)的加帽反應(yīng),且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。

1取10 μg RNA1.5 mL離心管,使用無(wú)核酸酶的水稀釋至15 μL;

265℃加熱5分鐘;

3取出離心管置于冰上5分鐘;

4依次加入以下組分:

組分

體積

上述變性的RNA

15 μL

10×Capping Buffer

2.0 μL

GTP(10 mM)

1.0 μL

SAM(2 mM)

1.0 μL

Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL

1.0 μL

【注】:10×Capping Buffer配方為:0.5 M Tris-HCl,pH 8.0;50 mM KCl10 mM MgCl2,10 mM DTT

537°C孵育30分鐘;

6RNA加帽完成,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

25末端標(biāo)記反應(yīng)

步驟適用于5末端帶有三磷酸的RNA標(biāo)記,且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大,其標(biāo)記效率受反應(yīng)體系中RNA與GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響。

1取適量RNA1.5 mL離心管,使用無(wú)核酸酶的水稀釋至14 μL;

265℃加熱5分鐘;

3)取出離心管置于冰上5分鐘;

4依次加入以下組分:

組分

體積

上述變性的RNA

14 μL

10×Capping Buffer

2.0 μL

GTP mix

2.0 μL

SAM(2 mM)

1.0 μL

Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL

1.0 μL

【注】:GTP mix為GTP和少量標(biāo)記物,其中GTP使用濃度參照注意事項(xiàng)5)。

537°C孵育30分鐘;

6RNA 5末端標(biāo)記完成,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

10603ES05

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑

2 KU

216.00

10603ES10

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑

10 KU

916.00

10603ES20

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑

20 KU

1695.00

10603ES60

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制劑

100 KU

11865.00

10132ES03

GTP (100 mM) 鳥苷三磷酸溶液(100 mM

1 mL

486.00

20311ES10

DTT 二硫蘇糖醇

10 g

280.00

20311ES60

DTT 二硫蘇糖醇

100 g

1688.00

20311ES80

DTT 二硫蘇糖醇

1 kg

13499.00

60102ES76

Tris Base (羥甲基)氨基甲烷

500 g

108.00

60102ES80

Tris Base (羥甲基)氨基甲烷

1 kg

168.00

60102ES90

Tris Base (羥甲基)氨基甲烷

5×1 kg

788.00

60102ES96

Tris Base (羥甲基)氨基甲烷

1桶(25kg

3188.00

 

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