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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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10154ESPCR高保真酶預(yù)混液(含染料) PCR Master Mix
| 參考價 | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 10154ES 型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：740更新時間：2024-09-04 17:02:22
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥/生物制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡介
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系。預(yù)混液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體，可簡便地進行高特異性的Hot Start PCR。預(yù)混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力，擴增目的片段的長度可長達13 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。適用于復(fù)雜模板的擴增，擴增產(chǎn)物為平末端。
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進行擴增，簡化了實驗步驟，節(jié)省了時間。本產(chǎn)品中含有電泳指示染料，PCR產(chǎn)物可直接進行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產(chǎn)品信息
貨號 | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08/10154ES60 |
規(guī)格 | 100 μL / 1 mL / 5×1 mL/100×1 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
推薦PCR反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
RNase-free ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板*** | 適量 | - |
Forward Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
Reverse Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)* | 25 μL | 1× |
*在終濃度1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
** PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.4 μM。
***不同模板的推薦使用量（25 μL反應(yīng)體系）:
模板種類 | 擴增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質(zhì)粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2.5 μL（不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10） |
推薦PCR擴增程序
兩步法程序(優(yōu)先推薦)
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
2）三步法程序(常規(guī)程序)
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性* | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火** | 60℃ | 20 sec | |
延伸*** | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
*預(yù)變性溫度和時間：推薦溫度：98°C，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
**退火溫度和時間：推薦溫度：60°C，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導致擴增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
***延伸溫度和時間：推薦溫度：72°C。時間：30 sec/kb，復(fù)雜模板根據(jù)實際情況可延長至60 sec/kb。
3）梯度溫度退火程序(難擴增基因推薦程序)
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 15，每個循環(huán)降低1℃ |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
變性 | 98℃ | 10 sec | 20 |
正常退火 | 55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
4）不同擴增程序下的特點
程序類型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特異性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR產(chǎn)量 | 中等 | 最高 | 中等 |
檢出率 | 高 | 中等 | 高 |
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
