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11105ES92HieffTM M-MLV （H-） Reverse Transcriptase 逆轉(zhuǎn)錄酶
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 11105ES92 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1003更新時間：2017-07-05 14:30:08
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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品介紹
HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆轉(zhuǎn)錄酶
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆轉(zhuǎn)錄酶 | 11105ES92 | 10000 U | -20℃ | 368.00 |
HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆轉(zhuǎn)錄酶 | 11105ES93 | 5×10000 U | -20℃ | 1586.00 |
產(chǎn)品描述
HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通過點突變技術(shù)得到的RNase H活性缺失的逆轉(zhuǎn)錄酶。野生型的M-MLV包含RNase H活性，該活性可催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因而在cDNA*條鏈的合成過程中可能會降解DNA/RNA雜合體中的模板RNA，影響cDNA合成長度和得率。與野生型M-MLV相比，HieffTM M-MLV (H-)的擴增能力增強，可擴增長達10 kb的cDNA。此外，其熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達42℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。
產(chǎn)品組分
編號 | 組分 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | |
11105ES92 (10000 U) | 11105ES93 (5×10000 U) | ||
11105-A | 5×HieffTM M-MLV (H-) Buffer | 250 μL | 5×250 μL |
11105-B | HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 5×50 μL |
產(chǎn)品應(yīng)用
全長cDNA文庫構(gòu)建；終點法PCR；實時定量PCR等。
活性定義
以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內(nèi)，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
RNase殘留檢測：200 U本酶和1 μg小鼠肝臟總RNA，37℃下孵育1 h，RNA電泳譜帶不發(fā)生變化。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20 ℃保存。
注意事項
1）請保持實驗區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均應(yīng)在冰上進行，防止RNA降解；
3）為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本；
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
*鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高*鏈cDNA的產(chǎn)量。）
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL |
or 1 μL | |
or 1 μL | |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應(yīng)液后加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并用移液器輕輕吹打混勻。
2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應(yīng)液 | 13 μL |
5×HieffTM M-MLV (H-) Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
溫度 | 時間 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30-60 min |
85℃ | 5 min |
【注】：1）當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃；
3）85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
※ 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase 第二代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶 | 11110ES92 | 10000 U | 626.00 |
11110ES93 | 5×10000 U | 2456.00 | |
HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶 | 11111ES92 | 10000 U | 1426.00 |
11111ES93 | 5×10000 U | 4626.00 | |
dNTP Mix (10 mM each) | 10124ES76 | 500 μL | 76.00 |
10124ES80 | 1 mL | 136.00 | |
Murine RNase inhibitor (40 U/μL) | 10603ES05 | 2 KU | 216.00 |
10603ES10 | 10 KU | 916.00 | |
2×HieffTM PCR Master Mix (With Dye) | 10102ES03 | 1 mL | 40.00 |
10102ES08 | 5×1 mL | 150.00 | |
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES60 | 100 U | 626.00 |
10135ES76 | 500 U | 2356.00 |
HB170619
