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500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

 

主要用途

 

500毫摩爾超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液是一種旨在模擬超氧化物歧化酶的功能，清除超氧自由基陰離子的輔助試劑。其適用于氧化應(yīng)急活性氧等研究。其適用于各種細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中超氧自由基陰離子的清除。產(chǎn)品即到即用，嚴(yán)格無(wú)菌，性能穩(wěn)定，高純活性。

 

技術(shù)背景

 

4-羥基-2,2,6,6,-四甲基哌啶氧（4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxy；TEMPO）是一種自旋標(biāo)記（spin label）的水溶性穩(wěn)定哌啶氮氧化合物（piperidine nitroxide），分子式是C9H18NO2，分子量為172.24。其主要作用在于自由通過(guò)質(zhì)膜，具有超氧化物歧化酶的功能，清除超氧自由基陰離子，起到活性氧的解毒作用，同時(shí)具有神經(jīng)保護(hù)、抗炎和鎮(zhèn)痛作用。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清除劑（Reagent A）   毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)        1份

 

保存方式

 

保存在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

*細(xì)胞培養(yǎng)液：用于支持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)液

細(xì)胞培養(yǎng)板（瓶）：用于細(xì)胞培養(yǎng)的容器

蓋玻片：用于細(xì)胞生長(zhǎng)的載體

臺(tái)式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞的收集

細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于細(xì)胞孵育

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

 

實(shí)驗(yàn)提示

 

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的清除劑（Reagent A）置于冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作：

 

方法一：貼壁細(xì)胞處理

 

• 在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的1孔放置蓋玻片
• 加入2毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
• 加入1毫升待測(cè)細(xì)胞（1至5 X 10⁵細(xì)胞）
• 輕輕搖動(dòng)，使細(xì)胞均勻分布
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育，直至細(xì)胞生長(zhǎng)到50％鋪滿率
• 小心抽掉細(xì)胞培養(yǎng)液
• 加入3毫升新鮮的用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
• 加入xx微升清除劑（Reagent A）
• 輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板，混勻
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時(shí)
• 小心抽掉含有清除劑（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
• 繼續(xù)后續(xù)操作

 

方法二：懸浮細(xì)胞處理

 

• 準(zhǔn)備1個(gè)25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶
• 加入2毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
• 加入1毫升待測(cè)細(xì)胞（5 X 10⁵細(xì)胞）
• 輕輕搖動(dòng)，使細(xì)胞均勻分布
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時(shí)
• 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
• 小心抽掉上清液
• 加入3毫升新鮮的*細(xì)胞培養(yǎng)液，混勻細(xì)胞顆粒群
• 加入xx微升清除劑（Reagent A）
• 輕輕搖動(dòng)離心管，混勻
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24小時(shí)
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
• 小心抽掉含有清除劑（Reagent A）的細(xì)胞培養(yǎng)液
• 繼續(xù)后續(xù)操作

 

方法三：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

• 準(zhǔn)備1個(gè)待測(cè)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
• 靜脈注射xx微升清除劑（Reagent A）/100克動(dòng)物體重 
• 或腹腔注射xx微升清除劑（Reagent A）/100克動(dòng)物體重 
• 或輸液/灌注xx至xx微升清除劑（Reagent A）/100克動(dòng)物體重
• 注射后30分鐘至4小時(shí)繼續(xù)后續(xù)麻醉、斷頸椎、解剖、組織制片等操作

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為1毫升規(guī)格（100倍濃度）
• 本產(chǎn)品即到即用，無(wú)需進(jìn)行任何處理
• 使用時(shí)，戴好手套
• 避免反復(fù)凍融
• 使用時(shí)，避免污染母液
• 細(xì)胞孵育時(shí)間可以根據(jù)用戶的具體情況調(diào)整，通常為6小時(shí)至24小時(shí)
• 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可以每天注射，持續(xù)1周，然后觀察分析