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凱學(xué)生物科技(上海)有限公司
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(酶聯(lián)免疫吸附法)技術(shù)服務(wù)

時間:2015/9/29閱讀:1924
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(酶聯(lián)免疫吸附法)技術(shù)服務(wù) ——科研合作/成果轉(zhuǎn)化,!

 服務(wù)內(nèi)容
    您只需將需要檢測的動物(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Pig,Monkey……)種類和檢測指標(biāo)(介素類、因子類)及標(biāo)本數(shù)量(48T/96T)告知我司業(yè)務(wù)人員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起,3周內(nèi)將檢測報告交到客戶手中!
 質(zhì)量保證
    我公司提供的檢測用所有試劑,適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本,靈敏度*,多年專業(yè)酶免服務(wù),我們保證對所售任何產(chǎn)品一概負(fù)責(zé)到底,每一份實驗結(jié)果都真實可靠!
 注意事項
    在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測,對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的標(biāo)本,及時儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,請造模取材后,將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項請與我司技術(shù)人員溝通。
 液體類標(biāo)本
    包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
*血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
*血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
*尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
*細(xì)胞培養(yǎng)上清:
    檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
*組織標(biāo)本:
    切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
  ELISA 實驗步驟: 
1.包被抗原:稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液,多肽濃度2ug/ml,0.1ml/孔,4oC過YE,洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉,0.1ml/孔,37oC1h,洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔,37oC 30分鐘,洗凈。
4.稀釋辣根過氧化物每標(biāo)記的二抗0.1ml/孔,37oC 40分鐘,洗凈。
5.顯色:TMB顯色
A液:四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液:5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。
終止液:2N硫酸
A液、B液各一滴,比光顯色10分鐘,終止液一滴。
6.450nm 波長測OD值

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