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輔酶（coenzyme）是一類可以將化學(xué)基團從一個酶轉(zhuǎn)移到另一個酶上的有機小分子，與酶較為松散地結(jié)合，對于特定酶的活性發(fā)揮是必要的。有許多維他命及其衍生物，如核黃素、硫胺素和葉酸，都屬于輔酶。這些化合物無法由人體合成，必須通過飲食補充。不同的輔酶能夠攜帶的化學(xué)基團也不同：NAD或NADP+攜帶氫離子，輔酶A攜帶乙?；?，葉酸攜帶甲?；?，S-腺苷基蛋氨酸也可攜帶甲酰基。

由于輔酶在酶催化反應(yīng)中其化學(xué)組分發(fā)生了變化，因此可以認為輔酶是一種特殊的底物或者稱為“第二底物”。這種所謂的第二底物可以被許多酶所利用。例如，目前已知有約七百種酶可以利用輔酶NADH進行催化。
在細胞內(nèi)，反應(yīng)后的輔酶可以被再生，以維持其胞內(nèi)濃度在一個穩(wěn)定的水平上。例如，NADPH可以通過磷酸戊糖途徑和甲硫氨酸腺苷基轉(zhuǎn)移酶作用下的S-腺苷基蛋氨酸來再生。由于輔酶的再生對于維持酶反應(yīng)體系的穩(wěn)定是必要的，因此，輔酶再生系統(tǒng)獲得了大量的實驗室以及工業(yè)應(yīng)用。

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